《螺旋藻(Spirulina)基因组外DNA的高效提取与纯化》.pdfVIP

第38卷第3期 海洋与湖沼 、，b1．38．No．3 2007年5月 0CEANOLOGIAETLIMNOLOGIASINICA May,2007 提取与纯化水 曹学成1，2 汪志平1① 杨灵勇1 徐步进1 (1．浙江大学原子核农业科学研究所农业部核农学重点实验室杭州310029；2．山东农业大学信息 科学与工程学院泰安271018) 提要 通过研究建立了一种简便、高效提取螺旋藻基因组外DNA(exDNA)的方法—— CTAB一蛋白酶K法。该法先以含200 lxg／ml蛋白酶K的CTAB提取液裂解螺旋藻细胞，并用 氯仿，异戊醇抽提得到总DNA粗提物，粗提物再经100 gg／ml蛋白酶K酶解及酚／氯仿／异戊 醇抽提得到总DNA，再利用凝胶冻融离心法得到高纯度exDNA。利用上述方法，对6株钝 同性及其与生理生态等特性的关系，暗示着exDNA可能与螺旋藻的分类、进化和形态建成 等重大生物学课题有关，并有可能担负着某些生物学功能。 关键词 钝顶螺旋藻，基因组外DNA，提取，纯化，CTAB．蛋白酶K 中图分类号 Q556．3 已有研究表明，大多数藻类除基因组DNA， 螺旋藻(Spirulina)为光合放氧、无异形胞、不 DNA或 还含有基因组外的DNA(extra．genomic 分枝、呈规则螺旋形的原核丝状蓝藻(cyano． extrachromosomal bacterium)(Ciferd，1983)。此属中的钝顶螺旋藻(S．DNA，简称exDNA)，它们以质 et et 粒(Laual，1980；Goffal，1990)、质粒状DNA platensis)和极大螺旋藻假maxima)两个种，因培 Claireet 殖设施与工艺简便、生产成本低、食用安全、营 (La et 养丰富，并具有较高的医药保健功能，而得到大 线状DNA(Leeal，1995)等形式存在于细胞内。 规模的开发利用，现已在全球形成了庞大的螺旋 鉴于构建内源转基因载体，开展系统演化和形态 et 建成等课题研究需要，螺旋藻exDNA存在与否、 al，2005)。与其他 藻产业(胡鸿钧，1997；Wang 农业与生物产业一样，种质资源创新是有效提升 存在形式、结构与功能等问题，一直是近年来国 当前螺旋藻产业技术水平与经济效益的重要途径， 内外藻类学领域研究的热点之一。Ciferd等(1993) 而通过研究揭示螺旋藻的分子遗传学背景，构建 曾对钝顶螺旋藻和极大螺旋藻，以及一些尚未定 转基因技术体系，是开展种质创新的必要前提。 名藻株DNA的组成进行了研究，但均未发现 为此，国内外在螺旋藻遗传育种学、分子生物学 及转基因技术等方面作了大量研究，并取得了重 螺旋藻中各分离到分子量不同的质粒，在电镜下 etal，2001；李晋 要成果(胡鸿钧，1997