23种中国兜兰属植物亲缘关系的ISSR分析.pdfVIP

第 35卷第6期 西 南 大 学 学 报 (自然科学版) 2O13年 6月 Vo1．35 NO．6 JournalofSouthwestUniversity(NaturalScienceEdition) Jun． 2013 文章编号：1673—9868(2O13)06—0015—07 23种 中国兜兰属植物亲缘关系的 ISSR分析① 陈 业， 石建明， 沈文华， 江 辉， 关 萍 贵州大学 生命科学学院，贵阳 550025 摘要 ：利用ISSR分子标记技术对 23种 中国兜兰属植物进行种间亲缘关系研究．研究发现 ：从 5O条引物 中筛选 出 6条引物进行扩增 ，共扩增 出 136条带，其 中多态性条带 136条 ，占总条带数 的 100 ，平均每条 引物扩增 出的 DNA条带数为22．7条 ；根据 ISSR扩增结果，采用 NTSY~pc2．10e分析软件进行遗传相似性系数分析 ，发现 23 种兜兰的遗传相似性系数在 0．1455～0．7805之 间，平均遗传相似性 系数为 0．3839；UPGMA 聚类分析发现 ，在 相似性 系数为 0．292时 ，23种 兜兰被 划分为 3个类群 ，即兜兰亚属 (Paphiopedilum)、宽瓣 亚属 (Brachypetalum) 和小萼亚属(Parvisepalum)，与形态学系统分类结果完全一致． 关 键 词 ：兜兰属 ；ISSR；聚类 分析 ；亲缘关 系 中图分类号 ：Q78 文献标志码 ：A 兜兰又 叫 “女士拖鞋兰”、“仙履兰”等 ，是兰科兜兰属 (Paphiopedilum)植物 的统称 ，国家一级保护 植物 ，有 “植物大熊猫”之称 ，是兰科植物中最具特色 的一个类群 ，也是最奇特 的观赏兰花…1… ，具有极 高的观赏价值和经济价值．全世界约有兜兰属植物 66种 ，近年来发表 10余个新种 ，总数增加到 80余 种_l3]，据刘仲健等 报道原产中国的兜兰种类 已达 27种．长期 以来 ，人们对兜兰过度追逐而进行 的毁 灭性采挖 ，使不少种类 已经到 了灭绝 的边缘[=5]．各种兜兰由于不同地域的相互 弓1种栽培 ，出现了许多同 物异名和同名异物的现象，品种名和品种分类十分混乱．因此 ，对现有兜兰品种准确 的鉴定和分析十分 重要．将 ISSR分子标记技术应用于兜兰属植物 的亲缘关系研究，可为兜兰的分类提供分子水平的证据 ， 并能克服许多弊端 ，对其保护策略和措施的制定具有重要 的意义．目前对兜兰属植物的研究主要集 中于 系统演化、生态地理 、形态学、细胞生物学和传粉生物学等方面 ]，有关分子生物学方面的研究报道较 少．AntonyVCox等_7]应用核 rDNA的 ITS核苷酸序列数据对 中国兜兰属 15个原生种进行划分 ；孙彩 云等 应用 RAPD和同工酶分子标记技术分析 中国兜兰种 间亲缘关 系．而利用 ISSR进行兜兰属植物亲 缘关系分析 的研究未见报道 ． ISSR(InterSimpleSequenceRepeat，简单序列重复间区)分子标记是 Zietkiewicz等 于 1994年提 出 的一种 DNA分子标记技术 ，其引物设计比SSR技术简单，又可揭示 比RFLP，RAPD，SSR更高的多态性 ， 具有DNA用量少、操作简单、快速灵敏、实验成本低等优点，并呈孟德尔式遗传_l】，目前已广泛用于植物 品种鉴定、遗传作图、基因定位、遗传多样性分析 、生物进化及分子生态学等方面的研究口 ”]．本试验采 ① 收稿 日期：2O12— 10—09 基金项 目：贵州省 自然科学基金资助项 目(黔科合 J字 (2008)2267号)． 作者简介 ：陈 业(1985一)，男 ，贵州毕节人 ，硕士研究生 ，主要从事发育分子生物学方面的研究 通信作者 ：关 萍，博士，教授 ． 16 西南大学学报 (自然科学版) http：／／xbbjbSWU．en 第35卷 用ISSR分子标记技术，从分子水平探讨 了23种 中国兜兰属植物的亲缘关系，旨在为兜兰资源的合理保护 利用和新品种的培育提供科学依据 ，并为兜兰指纹图谱的构建、分类鉴定和品种鉴别奠定理论基础． 1 材料与方法 1．1 材 料 将收集到的23种中国兜兰属