《农杆菌介导GFP基因转化苹果茎尖碎片获得转基因植株》.pdfVIP

果 树 学 报 2013，30(6)：909～913 JournalofFruitScience 农杆菌介导G即 基因转化苹果 茎尖碎片获得转基因植株 李玉生，吴永杰 ，程和禾，陈 龙，赵艳华，吴雅琴 (河北省农林科学院昌黎果树研究所 ，河北昌黎 066600) 摘 要：【目的l为解决基因型依赖性比较强的苹果品种遗传转化困难等问题，研究不同伤害处理方式下苹果茎尖碎 片的再生能力及其对苹果转化率的影响。方【法】以苹果 姬‘神’试管苗为试材，运用农杆菌介导法对苹果茎尖和离体 叶片进行遗传转化。【结果】将茎尖纵切为4部分时，可以高比率的形成愈伤组织(88．4％)和再生不定芽(59．8％)。在 20mg．L一-的卡那霉素筛选压下，300个茎尖外植体 中有 50．4％的茎尖碎片形成愈伤组织并获得了 19株表达 GFP的 转基 因植株 。而在 同样的筛选压下有 22．6％农杆菌介导的离体叶片形成愈伤组织 ，但不能获得转基 因植株。降低筛选 压可以提高植株再生率，但其中包含大量嵌合体，转化效率并没有明显提高。 【结论】苹果茎尖做为转化受体基因型 依赖性较低 ，要优于苹果离体叶片。 关键词 ：苹果 ：基 因型 ；转基因 ；GFP基 因；茎尖碎片 中图分类号：$661．1 文献标志码：A 文章编号：1009—9980(2013)06—0909—05 Transgenicplantsfrom fragmented shoottipsofappleviaAgrobacteri- um-mediatedtransformationwithGFPgene LIYu-sheng，WUYong-jie，CHENGHe-he，CHENLong，ZHAOYan—hua，WUYa—qin (OhnagiInstituteofPomology，HebeAcademyofAgricultureandForestryScience，Changli，Hebei066600China) Abstract：[Objective]Itisdifficulttointroduceanewgeneintosomeapplevarietieswhicharestrongly dependentongenotype．Inordertoresolvethisproblem ，theeffectsofdifferentdamagetreatmentonre— generationabilityofappleshoottipsandtransgenicconversionratewerestudied．[Method]TheGFPgene wasintroducedintotheshoottipsandtheleavesofJishenapplecuhivarbyAgrobacterium-mediatedge— netictransformation．[Result]Theresultsshowedthat，whenshoottipswerecutverticallyinto4parts，a highpercentageofcallusformation(88．4％)andadventitiousshootregeneration(59．8％)wasobserved．Un- der20mg。L～Kanamycinselectionpressure．over50．4％ fragmentedshoottipsdevelopedcallusand19 transgenicplantswithGFP(greenfluorescentprotein)expressionwereobtainedfromabout300explants． NotransgenicplantwasobtainedrfomAgrobacterium-mediatedtransformedleaves．eventhough22．6％of whichformedcallusafterCO—cultivationandselection．Ourexperimentsalsoshowedthatwithlowerselee- ti