《农杆菌介导的斑玉蕈遗传转化》.pdfVIP

微 生物学通报 Sep．20，2014，41(9)：1793-1799 M icrobiologyChina ◎ 2014byInstituteofMicrobiology．CAS tongbao@im．ac．cn DOI：10．13344~．microbio1．china．130784 农杆菌介导的斑玉蕈遗传转化 孙运奇1,2陈辉 张津京1,2陈明杰 冯志勇 汪虹 (1．南京农业大学 生命科学学院 江苏 南京 210095) (2．上海市农业科学院食用菌研究所 农业部南方食用菌资源利用重点实验室 国家食用菌工程技术研究中心 国家食用菌加工技术研发分中心 上海市农业遗传育种重点开放实验室 上海 201403) 摘 要：【目的】将农杆菌介导的转化应用于重要的工厂化栽培食用菌斑玉蕈中，建立稳定的 农杆菌介导的斑玉蕈遗传转化技术。【方法】将构建的双元载体 pYN6982转入农杆菌LBA4404 菌株中，以斑玉蕈 SIEF3133菌株打碎的双核菌丝为受体材料，利用根癌农杆菌介导的转化方 法进行斑玉蕈转化试验。【结果】经潮霉素抗性筛选、PCR鉴定以及有丝分裂稳定性试验验证， 表明潮霉素磷酸转移酶基因(hph)已经整合到斑玉蕈的基因组中；转基 因斑玉蕈菌丝在荧光显微 镜下可以观测到绿色荧光，表明增强型绿色荧光蛋白基因(egfp)已经在转基 因斑玉蕈菌株中获 得 了表达；通过 PCR检测，随机挑选的8个转基因斑玉蕈菌株中有 2个可以扩增出载体转移 DNA (T-DNA)边界重复序列外的卡那霉素基 因(，z)序列。【结论】获得了稳定遗传和表达的斑 玉蕈转基因菌株，建立了农杆菌介导的斑玉蕈遗传转化方法。农杆菌介导的斑玉蕈遗传转化中， 存在载体T-DNA边界重复序列之外的DNA序列转移到转基因斑玉蕈中的现象，有待进一步研究。 关键词：斑玉蕈，农杆菌，EGFP，遗传转化 Agrobacterium-mediatedtransformationinHypsizygusmarmoreus SUNYun．Qi， CHENHui ZHANGJin．Jing， CHENMing—Jie FENGZhi．Yong11女 WANG Hong● (1．CollegeofLiyeSciences，NanjingAgriculturalUniversity，Nanjing，Jiangsu210095，China) (2．InstituteofEdibleFungi，ShanghaiAcademyofAgriculturalSciences，KeyLaboratoryofEdibleFungiResourcesand Utilization(South)，MinistryofAgriculture，China，NationalEngineeringResearchCenterofEdibleFungi，NationalRD CenterforEdibleFungiProcessing，KeyLaboratoryofAgriculturalGeneticsandBreedingofShanghai， Shanghai201403，China) Abstract：O『bjeetive1UsingAgrobacterium—mediatedtransformationasatool，webuiltastable genetic transformation ofHypsizygus marmoreus．M『ethods1Atierbinary expression vector PYN6982 was仃ansformed into Agrobacterium tumefaciens LBA4404．we transfomr ed H marmoreus SIEF3133 blended vegetative dikaryotic mycelia