间充质干细胞及成骨细胞对多发性骨髓瘤细胞生物学行为影响机制探讨.pdf

问充质干细胞及成骨细胞对多发性骨髓瘤细胞生物学行为的影响及机制探讨 中文摘要 间充质干细胞及成骨细胞对多发性骨髓瘤细胞生物学行 为的影响及机制探讨 中文摘要 多发性骨髓瘤(Multiple 性浆细胞在骨髓微环境中不规则积聚引起溶骨性骨破坏、肾功能损害、贫血、高钙血 症和感染等临床表现，占血液科肿瘤的lO％．15％左右。尽管在过去的几十年中有关 MM发病机制、诊断和治疗的研究取得了较大的进展，但是仍然有许多重要的问题悬 而未解。目前MM仍是一种不可治愈的血液系统恶性肿瘤，MM的发病机制复杂， 近年主要集中在细胞遗传学异常、骨髓微环境与骨髓瘤细胞相互作用、NF．kB及Notch 信号通路和耐药机制几方面。大量研究表明骨髓微环境在骨髓瘤细胞的生长、存活、 耐药及归巢中起重要作用。 【目的】： ma玎ow stem 研究骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal 凋亡、自噬的影响，探讨骨髓微环境变化对MM细胞增殖、迁移及生物学行为的影 响，为MM临床治疗提供新的理论依据和实验基础。 【方法】： 分离绿色荧光(GFP)小鼠长骨，冲出骨髓并接种于培养瓶，取第3代绿色荧光 间充质干细胞，MTT法绘制细胞的生长曲线，流式细胞仪检测其细胞周期及表面标 及成骨细胞株与IL．6依赖的人多发性骨髓瘤细胞株XG．7的共培养，通过PI法、 AnnexinV／PI双标记法及MDC(单丹磺酰尸胺)观察直接共培养、间接共培养 胆固醇消耗剂甲基B环糊精破坏膜的完整性后，观察CDl38标记的XG．7的变化。 中文摘要 问充质干细胞及成骨细胞对多发性骨髓瘤细胞生物学行为的影响及机制探讨 【结果】： 分离培养的GFP．MSCs具有较强的增殖能力和较高的成骨细胞分化潜能，表型 接共培养后，促进MM细胞生长，其抗凋亡能力增强，处于S期的细胞较多，增殖 活性强，共聚焦显微镜观察其抗无血清诱导自噬能力增强。共培养条件下，PE标记 的CDl38在MM细胞胞膜上呈现极化状态，其中多数XG．7细胞是以极化的胞膜区 同OB或MSCs接触，加入甲基B环糊精破坏胞膜的流动性后，极化现象消失。 【结论】： 本实验成功的在体外建立一种简便可行的GFP．MSCs培养扩增方法，进而得到一 种高表达绿色荧光的Mscs，且该绿色荧光蛋白不影响Mscs生物学功能，能够持久稳 定表达，多次传代其荧光强度也无明显变化，是较为理想、方便、高效的示踪工具， 为下一步研究造血干细胞移植的显微解剖关系带来了方便。MSCs及OBs增强XG．7细 胞抗凋亡及抗自噬的能力，并可促进XG．7细胞的生长，对其生存增殖起到庇护作用； MM细胞可通过极化的粘附分子延长与骨髓基质细胞的接触时间，提示二类细胞密切 接触是保护MM细胞免受凋亡诱导剂作用的重要基础，为进一步阐明MM发病机制、 探索MM新的临床治疗靶点提供理论和实验基础。 【关键词】： 多发性骨髓瘤；绿色荧光蛋白；间充质干细胞；成骨细胞；自噬；粘附分子 作 者：张艳丽 指导教师：傅晋翔教授 II 间充质干细胞及成骨细胞对多发性骨髓瘤细胞生物学行为的影响及机制探讨 英文摘要 The effectsofthe stemcells and mesenchymal osteoblastsonthe of behaVior biological