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CRISPR..pptx
CRISPR/Cas介导的基因组定点编辑编辑技术;2013年初，一种全新的人工核酸内切酶clustered regularly interspaced short palindromic repeats (CRISPR)/ CRISPR-associated(Cas)9基因改造系统出现，它主要是基于细菌的一种获得性免疫系统改造而成，其特点是制作简单， 成本低，作用高效;CRISPR研究历史;CRISPR/Cas的基因座结构;接近90%的古细菌和40%的细菌的基因组或是质粒中至少存在一个CRISPR基因座;CRISPR/Cas的免疫机制分为相对独立的层次：;CRISPR的高度可变的间隔区(spacer)获得;CRISPR的高度可变的间隔区(spacer)获得;CRISPR/Cas系统分为：
TypeⅠ TypeⅡ TypeⅢ三种不同类型;Cas9 HNH结构域切割互补DNA链，而RuvC样结构域切割非互补DNA链;tracrRNA在DNA识别的过程中是必须的，可能是参与tracrRNA与目标DNA定向结合;tracrRNA保留23-48bp的序列就能够支持Cas9催化的DNA切割;Protospacer准确性对系统的影响;PAM对系统的影响;Cas9 可以识别化学合成的???链RNA发挥作用。;CRISPR/Cas系统的作用特性与限制性核酸内切酶相似，它对序列的特异性切割主要依赖于crRNA与Cas蛋白形成的核糖核蛋白复合物识别靶序列上的PAM 以 及protospacer;哺乳动物细胞中实验;SpRNase III不是必须的;两个基因同时切割;CRISPR/Cas 系统可以介导一个基因的多重编辑;哺乳动物ES细胞中实验;基因敲除小鼠的获得;双基因敲除小鼠的获得;精确突变小鼠的获得;共转染Cas9 mRNA, sgRNAs, and single-stranded DNA oligos进入同一个ES细胞能精确的同源指导修复homology directed repair (HDR)-介导的基因编辑
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