MIP-1α和Flt31基因佐剂联合应用对HPV16E7+DNA疫苗免疫效果的研究.pdf

中文摘舆 化包括单核细胞／臣噬细胞、T淋巴细胞、树突状细胞和嗜 酸性粒细胞奄内的多种免痰效应细胞，并对单核细胞、T淋 巴细胞及B淋巴细胞有免疫调节作用。此外，MIP．1et可诱 导IFN吖的产生，是～种激活nl型免疫反应的有效佐剂。 kinase3 醚氮酸激酶受钵3配体(Fins．1iketyrosine ligand， Fit31)是1993年首次发现并被成功克隆的一种早期造血L细胞 生长毽子，它与于缁懑困子(SCF)秘巨噬缁瘪集落刺激濯子 O以．CSF)有部分同源性。骨髓基质细胞和T细胞可表达有功 缝酶Flt31蛋爨，当冀与酪氦酸激酶受体3《fms—like tymsine kinase3 量，并促迸萁成熬，佼诱导衍生的DCs形态呈典篷的树突状， 摄取和加工抗原的能力明盟加强，是体内外刺激DCs生成的 最强大和最重要的细胞因子之一。 肿瘤细胞攻击的能力。 行酶切鉴定和测序筛选重组子；(3)经酶切鉴定和测序确认 中文摘鼹 后，从这两种克隆载体切取目的基因片段。将目的基因片段 基因片段，与经相同的内切酶处理的pcDNA3载体芝拨．构 接种含Amp的2YT培养基，挑取菌落、提取质粒进行酶切 签定和测亭露选鬻撼耋组予；(5)溺碱裂解法麸转纯麴DH5ct HPVl 鼠随视分为5缰，每组】4只；5维分别为pcDNA3组、 组。纯化后的质粒以生理盐水稀释，股四头肌肉注射免疫小 n仃时用 鼠，每次每只小鼠接季孛每种质粒50略，不足150 pcDNA3质糍补足，每3周免疫1次，戴免疫·次：术次免 疫恁嚣周每终随极撼取6只小鼠，无菌条件下取出髀照，用 CCK．8试剂盒检测麒对TC．1靶细胞的特异性杀伤能力。其 余夸鬣在菝黢沟皮下注嚣5xt妒个TC—l纲旎襞小氯戒瘪，一 周后隔曰观察小鼠成瘤情况，一个月后每周观察一次，记录 舅孛瘩垒长情}旯。小鬣成瘤纛随橇捅取不同处瑾绦静翳块，刽 各石蜡切片，HE染色，观察各组小鼠肿块组织细胞的病理 学形态。 中文摘燕 与预期值相符：(2)成功构建原核表达矮粒 pcDNA3蜃酶切结果证实成功掏建了真核表达质粒 疫小藏对W—l靶细胞的特异性杀伤吾分率分别为： pcDNA3／FIt31、pcDNA3／MIP．16E7混合 cc和pcDNA3／HPVl 76．00％，pcDNA3／MIP—l 1 6E7混合组 q和pcDNA3／HPV 单因素方差分析提示5组之间有明显差异(P0．01)：喇两比 较可褥：pcDNA3组的特异经杀伤西分率明显氐予其他各组， pcDNA3／HPVI 6E7混合缁、pcDNA3／MIP．1a和pcDNA3／ 显低予其链缝，统诗学分撬示5终之阕戏癌搴差异有显著性 4 中定。摘要 HPVl l6E7 6E7混合缰与pcDNA3／MIP．1gt和pcDNA3／HPV 混合组两者之间有统计学差别(尸。O．041)；其余各组间差别无 统计学意义(PO．05)。60天后各缀之间成瘤率的差异无统计 学意义(_尸tO．229)；(6)小鼠肿块组织的病理学观察示：典型 的肿瘤细胞形态。 终论：(1)用烫伤法成功克隆了小鼠MIP—t攫基强片段； DNA疫苗， 质粒混合疫苗免疫效果优于pcDNA3／HPVl6E7 DNA疫