Pim-3基因转染对大鼠肠黏膜上皮细胞损伤的保护作用的研究.pdf

摘要 修复的影响。 为此我们设想，Pim．3可能在急性烧伤大鼠肠屏障功能的损害中发挥作用， 并可能作为细胞内的一种内源性保护物质，对减轻烧伤引起的肠粘膜损伤起着 重要的保护作用。 本实验的总体研究思路为： 首先，建立严重烫伤大鼠模型，内毒素处理大鼠模型，通过检测肠道机械 死因二fa(TNF．a)、白介素．6(IL．6)和病理结果及Pim．3mRNA和蛋白水平，旨 屏障损伤及炎性因子TNF．a、IL．6之间的时效关系，并探讨这些变化的相关性。 ②分析内毒素和烧伤处理后的动物，相关指标有无统计学差异，为体外试验提 供依据。 然后，根据上部分的研究结果，以原代肠上皮细胞为研究对象，模拟烧伤 时对肠上皮细胞的直接影响，建立内毒素性肠上皮细胞损伤模型。将Pim一3转染 入肠上皮细胞用于防治内毒素性损伤，利用RT-PCR检测各项指标Occludin、 ICAM．1及IL．6、TNF．0【和Pim．3等，并利用流式细胞术观察各组细胞凋亡情况， 研究Pim．3对肠上皮细胞的保护作用及对炎症因子表达方式的影响。从细胞和分 子生物学水平，探讨Pim．3保护肠上皮细胞损伤的机制。 第一部分：(体内试验)急性烧伤大鼠Pim-3基因表达的变化及肠屏障损害的相 关研究 目的用烧伤仪制做成年大鼠严重烧伤模型(IIIo，30％TBSA)，内毒素处理 大鼠模型。通过检测烧伤后48h内不同时段大鼠回肠病理及肠屏障功能损伤等公 认指标，采用RT-PCR及western blotting等分子生物学方法检测Pim．3及相关指标 的变化，从整体动物水平，研究烧伤后肠屏障的损伤，以及Pim．3的变化。目的 在于证实烧伤和内毒素对内源性Pim-3基因在肠道表达的影响及Pim．3基因与肠 lll 摘要 黏膜损伤的相关性。 方法将实验大鼠随机分为三组：A组．烧伤组(n=30)；B组．内毒素(LPS) 2h、24h、48h 组(n=30)：C组．正常对照组(n=6)。各组依次在处理后3h、6h、l 取回肠组织，进行常规HE染色做病理切片，提取总RNA及总蛋白，并进行 RT-PCR及Western IL．6、TNF．0【在肠道的表达。 结果I、粘膜形态学改变经HE染色可见烧伤后3h绒毛出现水肿，肠粘膜 固有层充血、出血，炎性细胞浸润，表皮脱落，以伤后12h损伤最严重，伤后48 h肠粘膜病变还未恢复正常；内毒素组伤后6h上述变化加重，以伤后12h变化最 明显；烧伤组与内毒素组肠粘膜形态出现了同样改变，正常对照组无明显变化。 2、Pim．3的水平：正常大鼠回肠组织Pim．3mRNA和蛋白水平低表达，烧伤组及 内毒素组内源性Pim．3mRNA和蛋白水平在3小时表达开始增多，6dx时到达顶 基因表达与c组之间的差异有统计学意义(P0．01)，烧伤组分别为对照组的 h、6h、12h、24h、48 h闭锁蛋白mRNA量升高，分别为对照组的3．25+0．26、 h、6h、12h、24h、48h 6．65+0．24．、3．10-j：0．8，1．554-0．9，1．01+0．22倍；内毒素组3 内毒素组与烧伤组比较经统计学检验无显著性差异(P0．05)。4、ICAM．1的表 达：烧伤组、内毒素组ICAM．1mRNA的表达与对照组之间的差异有统计学意义 h、 内毒素处理后ICAM．1mRNA量增加，以伤后12h升高明显(尸0．01)。烧伤组3 lV 摘要 h、6h、12h、24 56．12+3．89倍；内毒素组3 h分别为对照组的37．8I+4．48，89．68+6．67。 检验无显箸性差异(P0．05)。5、炎症因子：正常肠组织IL．6、TNF．a无表达。 (pO．01)。