第四节 核酸的研究方法.ppt

第四节 核酸的研究方法 一、核酸的分离、提纯和定量测定 （一）DNA的分离 （二）RNA的分离 关键在于防止RNase对RNA的降解。 （三）核酸含量的测定法 二、核酸的凝胶电泳 凝胶电泳兼有电荷效应和分子筛效应。 (一)琼脂糖凝胶电泳： （二）聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE） (一)限制性内切酶（restriction endonuclease） 五、DNA聚合酶链式反应（polymerase chain reaction, PCR） 定义： 体外快速扩增DNA的方法。DNA双链经高温变性，分开的单连DNA分别与寡聚核苷酸引物互补结合（退火），在聚合酶、dNTP和Mg2+的存在下，DNA聚合酶催化DNA链的合成，如此经变性- 退火- 合成三步反复循环，使所需要的DNA片段得到特异的扩增。 六、核酸的核苷酸序列测定 1. DNA的化学法测序（ MaxamGilbert 法） * 用苯酚、氯仿-异戊醇或蛋白酶K等去除蛋白质。 用乙醇沉淀DNA。 用RNase去除RNA。 DNA与碱性蛋白结合形成核蛋白（DNP）。 DNP溶于1M NaCl, 不溶于0.14M NaCl。 常用 酸性胍盐 /苯酚 / 氯仿法提取RNA。 mRNA的提取可用 oligo(dT)n 亲和层析法。 定糖法 紫外吸收法 核酸 浓硫酸 或过氯酸 Pi + 钼酸 磷钼酸