脱氧核糖核酸转录.ppt

转录产物的后加工 1.mRNA前体的后加工 原核mRNA的原始转录产物都可直接用于翻译； 真核mRNA一般都有相应的前体，前体必须经过后加工才能用于转译蛋白质。 真核mRNA的原始转录产物- hn RNA-最终被加工成成熟的mRNA。 后加工： ①戴帽：装上5′端帽子，转录产物的5′端核苷酸的2位羟基被甲基化，装上甲基化的帽子。 Cap的重要性：为核糖体识别mRNA提供信号；可增加mRNA稳定性，保护其在转运时免遭核酸酶水解。 ③剪接： 将hnRNA中的内含子切除，将外显子拼接。 内含子参与转录但不表达，转录后RNA的分子量比成熟mRNA大几倍或几十倍，因此需要切除内含子，连接外显子。 加帽 5’端：m7GpppGpN 作用:稳定mRNA 5’端和翻译的起始有关 加尾 3’端: polyA尾巴 作用：稳定mRNA和翻译模板活性有关 mRNA前体的剪接 剪除内含子，连接外显子 2.tRNA前体的后加工 tRNA前体有两类： ①单个tRNA前体，在5′和3′端各有一段多余顺序； ②含二个tRNA的前体，除5′和3′端有长短不一的多余顺序外，在两个tRNA之间还有数目不等的核苷酸隔开。 真核生物tRNA前体后加工的相似步骤： ①修饰：对tRNA分子上的部分核苷酸进行修饰（包括甲基化、酰化、硫代和重排等）； ② tRNA前体的剪接，切除5′端的先导序列； ③添加或修复3′端CCA序列。 真核生物的18s rRNA、 5.8s rRNA、 28s rRNA基因串联构成转录 单位-rDNA,。 每个rDNA单位转录出45S的rRNA前体，前体经剪切后产生 18s rRNA、 5.8s rRNA、 28s rRNA rRNA 转录后的加工 逆转录：RNA 为模板，有逆转录酶的参与，在 4种 dNTP存在及适合的条件下，按碱基配对的原则，合 成 cDNA (complementary DNA，cDNA) 的过程。 1、逆转录病毒： 鸡肉瘤病毒（ ASV ） Rouse 肉瘤病毒（ RSV ） 小鼠白血病病毒（ MuLV ) 人类 T细胞白血病病毒（ HTLV--I Ⅱ） 爱滋病病毒（ HIV） SARS dNTP是脱氧核苷三磷酸（含脱氧核糖） NTP是核苷三磷酸（含核糖） 它们是由三个磷酸分子和一个（脱氧）核苷酸组成的 信使RNA，转运RNA，核糖体RNA 依赖DNA的DNA聚合酶（DNa dependent DNA polymerase， DDDP）；DDRP依赖DNA的rnA聚合酶（DNa dependent RNA polymerase， DDRP）；依赖RNA的DNA聚合酶（rNa dependent DNA polymerase， RDDP） 1结合启动子区，决定谁被转录；2的底物指核苷酸；3的模板指DNA模板链。 σ与核心酶结合后，使其产生构象变化 § 降低全酶与非特异性DNA的结合力（107／mol） § 增强全酶与启动子（R,B site）的专一性结合力 （1014mol） § 导致RNA链的延伸缓慢 （利福霉素 rifamycin、利福平 rifampin）－－抑制I位点 （利迪链菌素（streptollydigin）通过与β亚基结合而抑制延伸反应）－－－抑制E位点 是一种来自毒蘑菇鬼笔鹅蕈(Amanita phalloides)的真菌毒素，二环八肽，能抑制真核RNA聚合酶Ⅱ与RNA聚合酶Ⅲ转录。鹅膏蕈碱可与RNA聚合酶Ⅱ形成1：1的复合物，与RNA聚合酶Ⅲ形成松散复合物，特异抑制转录的延伸过程。但对RNA聚合酶Ⅰ，以及线粒体、叶绿体和原核生物RNA聚合酶对其不敏感。 最早是根据他们从DEAE－纤维素柱上洗脱的先后顺序而定出来的，后来发现不同的生物的三种RAN聚合酶洗脱的顺序并不相同 终止子有强、弱之分，强终止子含有反向重复顺序，可形成茎环结构，其后面为polyT结构，这样的终止子无需终止蛋白参与即可以使转录终止。 而弱终止子尽管也有反向重复序列，但无polyT结构，需要有终止蛋白参与才能使转录终止。 若对TATA盒子进行突变或敲除，发现产物减少的规模不如突变CAAT盒和GC盒大，但发现获得的RNA产物的起始点不固定。 禽类肉瘤病毒（avian sarcomas virus，ASV） Src基因首先在鸡肉瘤病毒(Rous Sarcoma Virus)中发现 ，c-src本来就属于病毒，但v-src不属于病毒，而是寄主细胞的复本。 转录(transcription)：以DNA单链为模板，核苷三磷酸NTP（ATP,GTP,CTP,UTP四种核糖核苷