负载SPIO聚合物纳米囊泡用于人结肠癌细胞磁共振分子成像的实验的研究.pdf

中山大学博士论文 负载SPIO聚合物纳米囊泡用于人结肠癌细胞磁共振分子成像的实验研究 1 负载SP0聚合物纳米囊泡用于人结肠癌细胞 磁共振分子成像的实验研究 专业名称：影像医学与核医学 博士研究生：冯仕庭 指导老师：李子平教授 孟悛非教授 中文摘要 目的： 水性SPIO聚合物纳米囊泡的理化特征；(3)体外细胞实验验证负载油性SPIO、 水性SPIO聚合物纳米囊泡标记人结肠癌细胞(LoVo)并进行M对成像的可能 性；(4)动物实验验证负载油性SPIO、水性SPIO聚合物纳米囊泡对结肠癌的 M对显像能力。 材料与方法： 1．实验步骤： 一丙交酯))，通过多次乳化及溶剂挥散法使共聚物在水溶液中自组装成囊泡， electron electron microscopy，TEM)和透视电镜(Transmission microscopy，TEM) 观察负载油性、水性SPIO聚合物纳米囊泡的直径、形态、分布；(3)MR测量 相同SPIO浓度的单纯SPIO胶体液、负载油性、水性SPIO聚合物纳米囊泡的 使细胞量达l×10?／n正，同时加入不等量的负载油性、水性SPIO聚合物纳米囊泡 中山大学博士论文 负载SPl0聚合物纳米囊泡用于人结肠癌细胞磁共振分子成像的实验研究 能力；(5)MTT(MethyIthiazolyl 聚合物囊泡的细胞毒性；(6)建立荷人结肠癌裸鼠移植瘤模型；(7)荷瘤动物 实验：18只裸鼠分为三组，每组6只，分别从尾静脉注射三种对比剂(单纯SPIO 胶体液、负载油性SPIO、水性SPIO聚合物纳米囊泡)，注射剂量为2．SmgFe／Kg， 肌肉的T2WI信号改变。 2．MR／扫描方法：采用T2WI和12 map扫描序列，用T2mapping软件测量T2 值。 3．细胞实验和动物实验结束后，用电镜检查和普鲁士蓝染色验证SPIO是否进入 肿瘤细胞，用普鲁士蓝染色计算标记率。 结果： 1．油性SPIO或水性SPIO分别负载于聚合物囊泡的中心膜及亲水内腔中，两者 的中心膜上；水性SPIO以“团簇”的形式被包裹在囊泡的内腔中。负载了SPIO 的聚合物囊泡没有改变自由SPIO的超顺磁性特征。和单纯SPIO胶体液相比， 负载SPIO聚合物囊泡表现出超高MRI敏感性。在相同铁离子浓度下，负载水性 泡的T2驰豫率。 2．负载SPIO聚合物纳米囊泡标记细胞时，在106／mL水平的细胞量，即可被MRI 检出；负载油性SPIO聚合物囊泡在与LoVo细胞培养后6h，即可引起肉眼所见 的信号下降：负载水性SPIO聚合物囊泡与细胞培养后3h，即可发现信号下降； 而且相同浓度的负载水性SPIO聚合物囊泡标记细胞后比负载油性SPIO聚合物 囊泡引起的T2驰豫率更高。负载SPIO聚合物纳米囊泡标记LoVo细胞比标记 L-02细胞引起的T2驰豫率更高。普鲁士蓝染色显示LoVo细胞浆内出现蓝色颗 粒，标记率在75％以上。电镜切片观察可见高密度铁颗粒位于细胞浆内。 (Opticaldensity)值之间无统计学差异；胎盼蓝染色试验表明不同浓度SPIO聚合 ll 中山大学博士论文 负载SPl0聚合物纳米囊泡用于人结肠癌细胞磁共振分子成像的实验研究 物囊泡标记细胞后，细胞的活力在95％以上。 4．动物实验：尾静脉注射负载SPIO聚合物纳米囊泡能引起肿瘤T2Wl信号下降， 注射后1铂为明显，最大值下降约11．4％，单纯SPIO胶体液则未能引起肿瘤信 号下降，三种对比剂引起的信号下降有统计学差异(pO．01)，但负载油性和水 性SPIO聚合物纳米囊泡引起肿瘤T2WI信号下降则无统计学差异；注射负载 SPIO聚合物纳米囊泡两组的肿瘤细胞普鲁士蓝染色显示细胞浆内出现蓝色颗 粒，电镜切片观察可见高密度铁颗粒位于细胞浆内；而注射单纯SPIO胶体液组 电镜和普鲁士蓝染色未有阳性发现。负载油性sPlO、水性SPI