《含多个基因元件的质粒标准分子的构建与分析 Construction and Analysis of Reference Molecule Contained Six Target Elements》.pdfVIP

研究资源 Resources 含多个基因元件的质粒标准分子的构建与分析 金荣愉+崔海峰+俞晓平叶子弘” 中国计量学院生命科学学院，浙江省生物计量及检验检疫技术重点实验室，杭州310018 +同等贡献作者 ”通讯作者，zhye@@u．edu．ca 摘 要质粒标准分子是指含有外源基因和内源标准基因特异性片段的重组质粒分子。为缓解转基因检 测用标准品严重缺乏的现状，本研究通过分析转基因作物的分子特征，选取启动子花椰菜花叶病毒的35S 启动子 CaMV 元件的质粒标准分子。经PCR鉴定、酶切、测序等验证标准分子构建的正确性，对其重复性、均匀性、均一 性、稳定性及定量方法进行系统研究。结果表明，针对质粒的3种定量方法中，数字PCR的准确度最高， PicoGreen法次之，紫外分光光度法的精确度较差；所建质粒的均匀性、重复性、稳定性均十分良好，合成不 确定度均在2．81％以下，符合标准物质候选物的要求；所建质粒可在低温条件下保存1个月以上，不宜高温 可用于定量转基因水稻及转基因棉花的转基因成分含量。本研究的质粒构建、制备和正确性验证方法可 为转基因检测用质粒标准分子的研制提供参照；重复性、均匀性、均一性、稳定性及定量方法等的分析结果 可为质粒标准分子的性状分析、保存环境等的相关研究或申报国家标准物质提供实验依据。 关键词质粒标准分子，稳定性，均匀性，转基因生物，生物计量 Constructionand ofReferenceMoleculeContainedSix Analysis Target Elements JIN YE Rong—Yu+CUIHai—Feng+YUXiao-PingZi-Hong++ Provincial and ofLifc Zhejiang KeyLaboratoryofBiometrologyInspectionQuarantineTechnique，CollegeSciences，ChinaJiliangUniversity 310018，China Hangzhou 4The authorswhocontribute equally 44 Corroespondingauthor,zhye@cjlu．edu．en AbstractReferencemoleculeisarecombinantwhichcontain and plasmid endogenousexogenousgenes．In order a for to referencematerial modified referencemolecule provide geneticallyorganismsdetection，the whichincludedsix mosaic genes Cauliflowervirus CaMV35S 、Bacillus thuringiensis carrier acyl phosphatesynthase SPS 、fiber-specificprotein fsACP 、nopaline 座机电话号码 和浙江省重点科技创新团队 No．2010R50028 收稿日期：2013．02．25接受日期：2013．05．31 万方数据 农业生物技术学报 1250 J。umal。fA铲iculturalBi。techn01。gy constructedandconfirmed and PCR，restriction phosphotransferase 』7、7_P丁Ⅱ was by analysis and methodwerealso results repeatability,uniformity,homogeneity,stabilityquantification analyzed．The shownas ofreferencemoleculewhich PCRwas following：Thequantitativeaccuracy quantifiedbydigital thePicoGreen the ofreferencemoleculewhich by method，and highest，followed quantitativeaccuracy was and ofreference quantified last；The byspectrophotometryrepeatability,uniformityhomogeneity were molecule molecules thereference couldbeusedasthecandidateofreference verywell，and mat