《中国药典三部标准(二零一六年年版)正文》.doc

中国药典三部标准(2005年版)正文 101种 A群脑膜炎球菌多糖疫苗 拼音名： A Qun Naomoyanqiujun Duotang Yimiao 英文名：Group A MeningococcaI Polysaccharide Vaccine 书页号：2005年版三部-34 本品系用A群脑膜炎奈瑟菌培养液，经提取获得的荚膜多糖抗原，纯化后加 入适宜稳定剂后冻干制成。用于预防A群脑膜炎球菌引起的流行性脑脊髓膜炎。 1 基本要求 生产和检定用设施、原料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”的有关要 求。 2 制造 2.1 菌种 生产用菌种应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的有关规定。 2.1.1 菌种名称及来源 生产用菌种为A群脑膜炎奈瑟菌CMCC 29201(A4)菌株。 2.1.2 种子批的建立 应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的规定。 2.1.3 种子批的传代 主种子批启开后传代次数不得超过5代，工作种子批启开后至接种发酵罐培 养传代次数不得超过5代。 2.1.4 种子批菌种的检定 2.1.4.1 培养特性及染色镜检 菌种接种于含10%羊血普通琼脂培养基，脑膜炎球菌在25%不生长。于35～37% 二氧化碳的环境中培养16～20小时，长出光滑、湿润、灰白色的菌落，菌苔易取 下，在生理氯化钠溶液中呈现均匀混悬液。染色镜检应为革兰阴性双球菌、单 球菌。 2.1.4.2 生化反应 发酵葡萄糖、麦芽糖，产酸不产气；不发酵乳糖、甘露醇、果糖及蔗糖(附 录ⅥV)。 2.1.4.3 血清凝集试验 取经35～37℃培养1 6～20小时的菌苔，混悬于含0.5%甲醛的生理氯化钠溶液 中，或56℃加热30分钟杀菌以后，使每1ml含菌1.o×10〈9〉～2.o×10〈9〉，与同群 参考血清做定量凝集反应，置35～3℃过夜，次日再置室温2小时观察结果，以肉 眼可见清晰凝集现象(+)之血清最高稀释度为凝集反应效价，必须达到血清原效 价之半。 2.1.5 种子批的保存 原始种子批和主种子批应冻干保存于2～8℃。 2.2原液 2.2.1 生产用种子 启开工作种子批菌种，经适当传代，经检定合格后， 接种于改良半综合培 养基或其他适宜培养基，制备数量适宜的生产用种子。 2.2.2 生产用培养基 采用改良半综合培养基或经批准的其他适宜培养基。培养基不应含有与十 六烷基三甲基溴化铵能形成沉淀的成分。 2.2.3 培养 采用培养罐液体培养。在培养过程中取样进行纯菌检查，涂片做革兰染色镜 检，如发现污染杂菌，应废弃。 2.2.4 收获及杀菌 于对数生长期的后期或静止期的前期中止培养，取样进行菌液浓度测定及 纯菌检查，合格后在收获的培养液中加入甲醛溶液杀菌，或采用加热方法杀菌。 以确保杀菌完全又不损伤其多糖抗原为宜。 2.2.5 纯化 2.2.5.1 去核酸 将已杀菌的培养液(单批或多批混合)离心后收集上清液，加入十六烷基三甲 基溴化铵，充分混匀，形成沉淀；离心后的沉淀物加入适量氯化钙溶液，其最 终浓度为1mol/L，使多糖与十六烷基三甲基溴化铵解离；加入乙醇至最终浓度为 25%，2～8℃静置1～3小时或过夜，离心收集澄清的上清液。 2.2.5.2 沉淀多糖 于上述上清液中加入冷乙醇至最终浓度为80%，充分振摇。离心收集沉淀， 用无水乙醇及丙酮各洗2次以上，沉淀物即为多糖粗制品。应保存在－20℃以下， 待纯化。 2.2.5.3 多糖纯化 将多糖粗制品溶解于1/10饱和中性醋酸钠溶液中，使其浓度达10～20mg/ml； 按1：2容量用冷酚(100g结晶酚溶于40ml的1/10饱和醋酸钠溶液)提取数次，离心收 集上清液，并用0.1mol/L氯化钙溶液或其他适宜溶液透析，加入乙醇至终浓度为 75%～80%；离心收集的沉淀物用无水乙醇及丙酮各洗2次以上，干燥后用灭菌注 射用