RNA干扰技术应用于淋巴瘤白血病肿瘤基因治疗的初步探讨.pdf

RNA干扰技术应用于淋巴榴，白血病肿瘤基因治疗的初步研究 RNA干扰技术应用于淋巴瘤／白血病肿瘤基因治疗 的初步探讨 专业：病理学与病理生理学 博士研究生：古聪敏 导师：林汉良教授 摘 要 淋巴瘤／白血病是淋巴造血系统的常见恶性肿瘤，在我国恶性淋巴瘤发病率占恶性 肿瘤总数3—4％，居恶性肿瘤第11位；白血病年发病率2，76／10万，是青少年最常见 的恶性肿瘤。淋巴瘤，白血病无论从发病机理到诊断分型都非常复杂．探讨其发病机制， 寻找特征性基因治疗靶点是近年来研究的热点。 Survivin是凋亡抑制蛋白家族(inhibitorofapoptosisproteins，IAPs)成员之一，也是目 前为止所发现的抗凋亡活性最强的掏亡抑制基因。它相对特异地表达于人胚胎组织以 及几乎所有人类肿瘤细胞．在正常成人组织中不表达或仅低表达；随一些癌前病变向 中起重要作用。此外，Survivin基因与肿瘤的发生、发展、侵袭与转移、放化疗敏感 性、患者生存时间及预后都有密切关系。Survivin所具有的肿瘤组织表达特异性，使 得针对survivin的肿瘤基因靶向治疗具有更好的特异性及安全性。研究表明，在不同 类型淋巴瘤与白血病细胞中存在survivin基因的过表达，并且其表达程度肿瘤细胞分 化程度、预后不良和复发等密切相关，提示Survivin基因与淋巴瘤／白血病的发生、 发展有密切关系，是针对淋巴瘤／白血病基因治疗的一个潜在靶点。 RNA干扰(RNAinterference，RNAi)是近年发展起来的一种基因沉寂技术，因 其高度的序列特异性和基因沉默的高效性而成为功能基因组研究、肿瘤基因治疗、抗 病毒感染和基因药物筛选等多领域研究的重要手段。本文根据survivin基因高表达 于各类型淋巴瘤组织和淋巴瘤／自血病细胞株的特性，采用化学合成siRNA(small interference RNA，shRNA)载体表达技术，构 RNA)法和短发夹RNA(shorthairpin 建了pSilence_rTM 淋巴瘤／白血病细胞系，观察Survivin表达沉默对淋巴瘤／白血病细胞包括细胞凋亡、 增殖和化疗药物药敏性等在内生物学特性的影响，初步探讨Survivin基因在淋巴瘤／ V RNA干扰技术应用于淋巴瘤，白血病肿瘤基因治疗的初步研究 白血病作用机制及其在肿瘤基因靶向治疗中的意义。 全文分五部分。 一RNA干扰应用于淋巴瘤／8血病肿瘤基因研究的靶基因筛选 P21等肿瘤凋亡相关基因等在淋巴瘤，白血病组织中表达情况，探讨它们与淋巴 瘤／白血病的相关性，拟筛选出RNA干扰最适合的靶基因。 方法收集190例石蜡包埋非霍奇金淋巴瘤(NHL)组织，10例淋巴结反应性增生组 等在淋巴瘤组织和淋巴瘤／白血病细胞系的表达情况。 结果免疫组化结果显示，上述抗凋亡基因中Survivin在190NHL组织阳性表达率最 造血系统肿瘤细胞系Jurkat、Raji、Daudi细胞中呈强阳性表达；在正常人外周 血淋巴细胞不表达。 结论实验结果表明．Survivin异常表达与淋巴瘤发生、发展有密切关系，可作为评 价淋巴瘤恶性程度和临床预后的重要指标。Survivin在NHL高表达，提示干扰 其表达可产生较强的细胞生物学特性改变。是RNA干扰用于淋巴瘤／白血病肿 瘤基因研究的一个潜在靶点。 二RNA干扰Survivin基因在淋巴瘤／8血病细胞中的表达 巴瘤／白血病细胞系。 RNA干扰技术应用于淋巴I斟，白血病肿幅j占因治疗的韧步研究 方法和结果 1构建重组shRNA表达载体 4．1-CMVneoDNA，经BamHI和HindlH 从大肠杆菌DH50提取表达载体pSilencer 双酶切后，与合成的DNA模板链连接，转化大肠杆菌DH5c撇0阳性菌落；增菌培 养后提取载体DNA进行测序，结果