选择性环氧合酶-2抑制剂抗胃癌作用机制研究.pdfVIP

2006届博：lj研究生毕业符辩论文 中文摘要 选择性环氧合酶一2抑制剂抗胃癌作用机制的研究 摘要 化学反应的限速酶，存在COX一1和COX一2两种同工酶。大量研究表明， 环氧合酶一2(COX一2)的过度表达与消4Ja系肿瘤的发生、发展密切相关， 为消化系肿瘤的化学预防和治疗提供了新的作用靶点。体内外研究已证 明，选择性COX，2抑制剂能预防结肠癌发生、发展和转移，并已成功 应用于结肠癌的化学预防。近年来，选择性COX一2抑制剂在消化系肿 瘤防治中的应用及其在抗肿瘸作用的分子生物学机制等方面取得了不 少进展，但对胃癌及其癌前痫变的作用及相关机制的研究尚有待深入。 本研究分为三部分： 第一部分 尼美舒利对乙基硝基亚硝基胍诱导胃癌化学预防中信号 转导通路相关基因表达影响的研究 目的：从信号转导通路探讨选择，陛环氧合酶(cox)。2抑制剂尼美舒 利对乙基硝基亚硝基胍(ENNG)诱导大鼠胃癌及癌前病变化学预防作 用的机制。 方法：按照给药方法和病理结果将大鼠胃组织标本分为三组：尼美 2006届博：i研究生毕业苔辩论文 中文摘要 舒利预防组， ENNG诱导癌前组和阴性对照组；每组5份标本，混合 后各组分别抽提胃粘膜标本RNA。采用大鼠“信号转导通路发现者” 基因芯片分别对尼美舒利预防组、ENNG诱导癌前组和阴性对照组的信 号转导通路相关基因的表达谱进行分析；应用RT-PCR方法对部分芯片 结果进行验证。 结果：尼美舒利预防组与ENNG诱导癌前组相比，共有56个基因 的表达水平有显著差异：有20个基因表达上调(大于2倍)，有36个 基因表达下调(小于50％)。 结论：基因表达谱生物芯片技术可以获得选择性COX一2抑制剂尼 美舒利在ENNG诱导胃癌过程中信号转导通路改变信息，对于从信号 转导方面进一步明确尼美舒利对胃癌化学预防作用的机制具有指导意 义。 第二部分 尼美舒利依赖和不依赖环氧合酶一2途径抗胃癌细胞作用机 制的研究 目的：从依赖和不依赖COX．2途径探讨选择性COX一2抑制剂尼美 舒利抗胃癌细胞作用的机制。 方法：采用COX一2 RNA干扰(RNAi)技术处理胃癌细胞系AGS， 沉默其mRNA表达。根据处理方式不同将AGS细胞标本分为四组： 2006屈悄J：硼f究生毕业菩辩沦文 中文摘要 对照组AGS细胞(空白对照组1。采用RT-PCR和Western Blotting方法 检测COX一2、Bcl一2、p21讹“和p27“P1的基因表达情况。 和Western Blotting检测的蛋白质的趋势基本一致。COX一2基因表达结 表达无显著差异(P0．05)：p2l、、盯1和p27¨p1的表达结果基本一致， 和AGS一4的表达无显著差异(P0．05)。 结论：选择性COX一2抑制剂尼美舒利通过依赖COX．2途径抑制 达，从而发挥其抗胃癌细胞作用。 第三部分维生紊E对胃癌细胞系AGS环氧合酶一2转录和活性的影响 目的：探讨维生索E对胃癌细胞系AGSCOX．2转录和活性的影响。 方法：以选择性COX．2抑制剂尼美舒利作为阳性对照，应用不同 浓度的3利，维生素E(a．生育酚、a一生育酚醋酸盐和y一生育酚)分别 2006扁博士研究生毕业器辩论文 中文摘要 h和24 对AGS细胞进行干预，作用16 h后，以逆转录聚合酶链反应 (RT-PCR)检测COX一2mRNA和COX一1mRNA的表达，以COX活性 检测试剂盒检测COX一2和COx—l活性。 结果：与空白对照组相比，3种维生素E对AGS细胞COX一2mRNA、 COX—l mRNA的表达和COX．1活性均无显著影响。a一生育酚和Y一生 育酚对AGS细胞的CO