延长球孢白僵菌油剂贮存期途径研究.pdf

摘要 本论文是在安徽农业大学虫生真菌研究所研究的基础上，对延长球孢白僵菌油剂 贮存期作进一步研究。主要从球孢白僵菌高质量孢子粉的制备与贮存、油剂配制前后 进行处理及油剂与农药混配后相容性测定等方面出发，试图为常温下白僵菌油剂贮存 期延长探索一些新的途径。试验主要研究途径及结果如下： 1．试验从白僵菌对营养要求韵角度出发，在白僵菌产孢培养基中添加不同的碳、 率、含水量。通过分析比较，筛选出了在实验条件下制备产量高、粉质优、活力强、 含水量低的白僵菌孢子粉产孢培养基中可以添加的最佳碳有蔗糖、葡萄糖等，最佳氮 源有硝酸钾、蛋白胨等。另外，不同的白僵菌菌株对高温、缺乏营养等不利环境的忍 受力不同，本实验对三个不同寄主的菌株所产孢予粉质量进行检测，发现菌株Bbl3 所产的孢子粉质量明显优于其他两个菌株。 2．在筛选碳、氮源的基础上，试验将白僵菌孢子粉制备过程中所需的营养需求及 培养条件进行综合考虑，以不同的培养温度、pH值及培养基中所添加的不同碳、氮源， 微量元素进行正交实验，以所产孢子的含孢量和萌发率为主要指标，筛选确定了适合 球孢白僵菌Bbl3孢子生长的最佳碳源是葡萄糖，最佳氮源是蛋白胨，微量元素铜和 锌对产孢和孢子萌发有明显促进作用，最适pH值为6～7，最适培养温度是20～25。C。 3．孢子粉贮存过程中，温度和含水量是影响孢子贮存寿命的重要因素。在4℃和 25℃下，对五种含水量的孢子粉进行为期18个月的活孢率测定，分析结果得出，在4 ℃下，含水量为1．25～9．87％各处理的孢子贮存18个月，活孢率基本维持在90％以 上，高含水量处理(13．89％)的孢予粉在前9个月的活孢率从97．38％缓慢下降至 77．94％，此后活孢率下降加速，至420天时孢子全部失活，表明该含水量高的孢子 粉即使冷贮也不宜七个月(此时活孢率为84．11％)；在25℃下贮存，含水量13．89 ％的孢子粉在第30天检测时孢子全部失活(未检测到萌发的孢子)；含水量9．87％、 低含水量处理(1．25％)的活孢率下降趋势显然缓于较高含水量处理，18个月时活孢 率还有(15．94±1．26)％。因此，在常温下贮存孢子，含水量必须控制在5％以下， 才能有5个月左右的贮存期并使活孢率达到80％。 4．对白僵菌孢子进行限制营养培养和高温水浴等逆境处理并配成油剂后，限制营 养所得孢子配成油剂的活孢率与对照相比，两者的活孢率存在显著差异。优化培养基 制备孢子所配的油剂在贮存过程中，孢子活孢率虽然随着时间的推移在逐渐下降，但 活孢率的测定值都高于同期限制营养的油剂活孢率。从第120天开始，限碳的油剂活 孢率(38．3％)就明显的低于限氮的油剂活孢率(40．3％)，随后一直低，且存在差 异显著性，到第240天时，限碳的油剂活孢率降至为O，而限氮的油剂贮存到第330 天时，活孢率还维持在5．64％，由此可以看出，限氮培养的白僵菌孢子所配油剂的贮 存期要比限碳的长。 经过500水浴处理的孢子配成油剂后，贮存前270天，油剂中孢子活孢率与对照 相比，都低于对照，均存在差异显著性，且水浴时间越长，孢子活孢率越低。但随着 时间的推移，水浴后的孢子其油剂活孢率降低较对照降低缓慢，到第300天后，水浴 后的孢子其油剂活孢率反而慢慢高于对照，存在差异显著性，因此可以得出适当地对 臼僵菌孢子进行高温处理，可以在油剂贮存后期提高其活孢率。另外，水浴30分钟 的孢予和水浴60分钟的孢子其油剂在贮存300天后，话孢率也存在差异显著性，因 此可以看出水浴时间适当延长可以在一定程度上延长油剂中后期孢子的活孢率。 5．不同时间段对白僵菌油剂添加外源营养，与对照相比，其孢予的萌发率都有所 提高，且与对照(萌发率为5．42％)基本存在差异显著性。而分别在前三个月对油剂 添加外源营养其孢子萌发率比分别在后三个月添加的效果要好，且它们之间存在显著 差异，尤其在第三个月添加外源营养后，孢子的活孢率达到了8．41％，明显高于对照 和第三个月后添加外源营养的油剂中的孢子活孢率，分别为6．03％、5．59％、5．74 ％。所以对在常温贮存的白僵菌油剂适时添加外源营养，对于恢复孢子活力、提高油 剂的活孢率是有一定的效果。 6．球孢白僵菌孢子与色拉油、石蜡油的相容性很好，但通过耐热性测定可知，处 理温度的高低、处理时间的长短，对不同制剂中的臼僵菌分生孢子的萌发率和生活力 都有影响。水剂和石蜡油剂中分生孢予随着处理温度的升高、处理时间的加长，其萌 发率随之降低；对于色拉油剂中的分生孢子，除了在其萌发率达90％以上的速率比对 照有所推迟外(约3h)，并没有影响