免疫定性试验结果判读(周育洋).ppt

临床免疫定性试验结果判读 泗阳县人民医院 周育洋 boatman7799@ 今天的复习题 1、简述实验室选择免疫定性检测敏感性、特异性、预测值、符合率的原则，并举例说明。 2、简述丙肝抗体检测实验室诊断流程。 3、简述造成RPR试验假阳性的一部分原因。 本课件免疫定性试验仅指临床通常使用的基于抗原-抗体反应原理的试验 抗原-抗体反应的特点： *特异性 *比例性 前带（抗体多）后带（抗原多） *可逆性 pH 离子强度 抗原抗体反应类型 沉淀反应 可溶性抗原 凝集反应 颗粒性抗原 补体参于的反应 中和反应 标记免疫 荧光 放射 酶标 发光 金标 影响抗原-抗体反应的因素 反应物自身的因素： 抗原： 可溶性 颗粒性 细菌 细胞 抗体： 来源 浓度 特异性 亲和力 反应环境条件： 电解质 酸碱度 温度 内源性干扰因素 类风湿因子、补体、异嗜性抗体、治疗性抗体、自身抗体、溶菌酶、磷脂、药物小分子、总蛋白浓度等。 类风湿因子（RF）干扰 RF一般为IgM型，亦有IgG和IgA型。 RF具有与变性IgG产生非特异结合的特点。 在捕获法IgM型特异抗体的测定中表现最为明显，因为此时固相包被的抗体为抗人μ链抗体， IgM型RF的存在可使其大量结合于固相。 类风湿因子干扰的排除 稀释标本 改变标记抗体 用变性IgG预先封闭标本中RF 测抗原,可加入还原剂如2-巯基乙醇去除RF 使用特异的鸡抗体IgY作为标记或固相抗体 补体干扰 固相抗体和标记二抗的抗体分子可发生变构，从而其Fc段的补体C1q结合位点被暴露出来，这样C1q就成为一个中介物将二者交联起来，从而出现假阳性结果。 固相抗体也会因为活化补体的结合，封闭抗体的抗原表位结合能力，而引起假阴性结果或结果偏低。 补体干扰的排除 56℃ 30min加热可使标本中补体C1q灭活 使用特异的鸡抗体IgY作为标记或固相抗体 自身抗体干扰 自身抗体如抗甲状腺球蛋白、抗胰岛素等，能与其相应靶抗原结合形成复合物，在免疫测定方法中可干扰相应抗原抗体的测定。 为避免以上情况出现，可在测定前用理化方法将其解离。 外源性干扰因素 溶血、细菌污染、标本贮存时间过长、凝固不全、反复冻融。 标本溶血 注意避免出现严重溶血。 血红蛋白类似过氧化物的活性，使反应显色。 标本被细菌污染 细菌的生长，其所分泌的一些酶可能会对抗原抗体等蛋白产生分解作用。 细菌的内源性酶如大肠杆菌的β-半乳糖苷酶本身会对用相应酶作标记的测定方法产生非特异性干扰。 标本贮存时间过长 标本在2～8℃下保存时间过长，IgG可聚合成多聚体，在间接法免疫测定中会导致本底过深、甚至造成假阳性。 血清标本如是以无菌操作分离，则可以在2～8℃下保存一周，如为有菌操作，则建议冰冻保存。样本的长时间保存，应在－70℃以下。 标本凝固不全 血液采集后，离心分离血清没有完全凝固，离出的“血清”并非为完全的血清，其中仍残留部分纤维蛋白原，易造成假阳性结果。 血液标本采集后，应使其充分凝固后再分离血清，或标本采集时用带分离胶的采血管或于采血管中加入适当的促凝剂。 冰冻保存标本避免反复冻融 反复冻融所产生的机械剪切力将对标本中的蛋白等分子产生破坏作用，从而引起假阴性结果。 几个统计学概念 正态分布(Gaussian distribution) 当一质控物用同一方法在不同的时间重复多次测定，且测定数据足够多时，如以横轴表示测定值，纵轴表示在大量测定中相应测定值的个数，则可得到一个两头低，中间高，中为所有测定值的均值，左右对称的“钟形”曲线，亦即正态分布，又称高斯分布。 正态分布的基本统计学含义可用均数（X）、标准差（s）和概