免疫检验 第十四章 细胞因子的检查.ppt

ELISPOT方法学评价 优点： 特异性高 操作简便、快速，无需依赖细胞株 影响因素较少且易控制，重复性好，方法容易标准化。 缺点： 所测定的只是细胞因子的蛋白含量，与其生物活性不一定呈正比 结果与所用的抗体来源及亲和力有很大的关系 敏感性相对较低 标本中细胞因子的可溶性受体，会影响特异性抗体对细胞因子的结合 四、其他检测技术 偏振荧光检测技术 激光共聚焦显微镜 发光技术 免疫组织化学技术 第五节 细胞因子与细胞粘附分子测定的临床应用 细胞因子的测定主要应用于： 特定疾病的辅助诊断 机体免疫状态的评估 临床疾病治疗效果的监测和指导用药 疾病预防 一、临床应用原则 细胞因子和粘附分子的异质性、功能交叉性和多样性、来源的复杂性和组织细胞的非特异性，决定了在进行这些分子检测时，必须对方法选择和结果判断作出综合考虑。 细胞因子的检测方法多种多样，各有利弊。 高敏感性方法：特异性的降低、废弃物难处理 活性测定方法：定性试验 基因分析法：利于细胞内定位分析、操作烦琐 （一）方法的联合应用 常用临床标本：抗凝全血并分离获得单个核细胞。血清或血浆 炎症局部细胞因子的水平：局部分泌液 细胞因子或粘附分子的细胞内定位检测：相应细胞 相应细胞因子的基因和mRNA表达：相应细胞 疗效观察和预后判断：疾病急性期和恢复期双份标本进行动态观测 免疫荧光染色和流式细胞分析：注意待检细胞的活性和状态，以保 证结果的特异性 （二）标本的适当选取 意义： 举例： T细胞、巨噬细胞和上皮样细胞分泌相应细胞因子的 功能：IL-1、 IL-2、IFN-γ和GM-CSF Th1/Th2细胞平衡状态：IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ （三）细胞因子的联合检测 二、特定疾病诊断的辅助指标 （一）细胞因子检测在特定疾病诊断中的意义 感染性疾病、免疫炎症、移植排斥反应：TNF、IL-1、IL-6、IFN-γ 肝脏损伤的两种炎症介质：TNF、IL-6 活动性结核：IL-4 ↑，IFN-γ及IL-2 ↓ 结核性胸膜炎： IFN-γ及IL-2 ↑,IL-4 ↓ 类风湿关节炎： TNF、IL-1、 IL-6、IL-8、MCP-1 ↑ 溃疡性结肠炎：IL-15 ↑ 哮喘：IL-5 ↑ （二）粘附分子检测在特定疾病诊断中的意义 E-钙粘素：表达缺失，提示胃腺癌及其分化程度的早期辅助诊断；突变与动脉粥样硬化有关。 CD44：高表达，提示肿瘤转移 三、评估机体的免疫状态、判断治疗效果及预后 TNF-α：自身免疫性疾病 GM-CSF：血液病 IFN-γ：肿瘤 。 1．细胞因子和细胞粘附分子的特性是什么？可分为几类？ 2．细胞因子生物活性测定法的种类，各用于哪些细胞因子的检测，主要优缺点？ 3． ELISPOT的原理、用途、与ELISA的异同是什么？ 4．在应用流式细胞术分析细胞因子时，需要哪些靶细胞活化剂？各自的作用是什么？ 5．如何利用细胞因子检测来判断Th1/Th2细胞平衡？ 思考题 细胞因子和粘附分子是构成免疫应答的重要物质基础，检测这些分子可反映机体的免疫状态。 细胞因子或粘附分子的检测方法包括生物学测定法和免疫测定法两大类。 细胞因子和粘附分子检测的临床意义。对某些特定疾病具有诊断价值；对细胞因子治疗具有监测和指导用药的意义；对机体的免疫状态具有评价作用。 小 结 * 第十四章 细胞因子与细胞粘附因子检测及应用 在免疫细胞分化发育、免疫调节、炎症反应、造血功能中均发挥重要作用，并参与人体多种生理和病理过程的发生和发展。 细 胞因 子 由活化的免疫细胞及部分基质细胞分泌的、主要介导和调节免疫应答及炎症反应的具有高活性、多功能的小分子蛋白质。 细胞粘附分子 是一类介导细胞与细胞、细胞与细胞外基质间粘附作用的膜表面糖蛋白。 在胚胎的发育和分化、正常组织结构的维持、炎症与免疫应答、伤口修复、凝血与血栓形成、肿瘤转移等过程中具有重要作用。 一、细胞因子的共同特性与作用方式 与相应受体特异性结合才能发挥作用。细胞因子可以旁分泌、自分泌或内分泌的方式发挥作用。 CKs的共同特性 1.高效性： 靶细胞-受体；高亲和力结合 2.多效性： 一CK多靶多效 3.重叠性： 多CK一靶一效 4.协同性： 一CK强化它CK 5.拮抗性： 一CK抑制它CK 6.网络性： 多CK互相平衡 肥大细胞 胸腺细胞 B IL-4 多效性 pleiotropy 活化、增殖、分化 增殖 增殖 IL-2、 IL-4、 IL-5 IL-4 + IL-5 B细胞 IL-4 IFN-g 拮抗性antagonism 重叠性 redundancy 协同性 s