第九章 酶的非水相催化.pptVIP

6 其他特性 在有机介质反应中，酶所处的pH 环境与酶在冻干或吸附到载体上之前所使用的缓冲液 pH 值相同。这种现象称之为pH记忆。 酶在有机介质中催化反应的最适pH值通常与酶在最后保存其的水溶液中反应的最适pH 值接近或者相同。利用酶的这种pH印记特性，可以通过控制缓冲液中pH值的方法，达到控制有机介质中酶催化反应的最适pH值。 一方面有机溶剂不会改变酶的离解状态，另一方面酶在有机溶剂中结构的刚性增加。 分子记忆：酶通过配体诱导、相互作用改变酶的构象，从而获得与配体类似物结合的能力，这种由配体诱导产生的酶的记忆称为分子记忆。 这种记忆在有机相中可以保持，但重新溶于水后会消失。因为在有机相中酶的刚性增加而在水相中酶的活性增加。 酶在有机介质中由于水分子的减少，相对来说酶分子的构象表现出比水溶液中更具有“刚性”特点。因而使通过选择不同性质的溶剂来调控酶的某些特性成为可能。例如在有机溶剂中，可以利用酶与配体的相互作用性质，诱导改变酶分子的构象，利用“分子记忆”调控酶的底物专一性、立体选择性和手性选择性等。 有机介质酶催化反应的优点 反应体系中的含水量减少还可以将加水反应转为其逆反应，如酯和肽的合成、酯交换反应。 由于引起酶变性的许多因素都与水的存在有关，因此在有机介质中酶的稳定性得到显著提高。 在有机介质中进行的酶促反应，因为酶不溶，所以可以省略分离过程，提高回收率。 若选择低沸点的有机溶剂可以容易地分离纯化产物。 同一种酶在不同的有机溶剂中可以表现出不同的立体选择性，以此可改变酶对底物的专一性。 有机介质中绝大多数有机化合物溶解度很高，因此非极性底物的溶解度会提高，有利于酶促反应的进行。 由于有机溶剂的存在, 水量减少，大大降低了许多需要水参与的副反应，如酸酐的水解、氰醇的消旋化和酰基转移等。 非水介质还可以有效避免微生物的污染。 酶在非水系统中不易脱离吸附的表面，固定化方法简单、分离纯化步骤简化、重复使用次数增加。 本章 目录 9.4 有机介质中酶催化反应的条件及其控制 酶在有机介质中可以催化多种反应，主要包括：合成反应、转移反应、醇解反应、氨解反应、异构反应、氧化还原反应、裂合反应等。 酶在有机介质中的各种催化反应受到各种因素的影响：酶的种类和浓度、底物的种类和浓度、有机溶剂的种类，水含量、温度、pH和离子强度等。 1 酶的选择 不同的酶具有不同的结构和特性，同一种酶，由于来源的不同和处理方法（如纯度、冻干条件、固定化载体和固定化方法、修饰方法和修饰剂等）的不同，其特性也有所差别，所以要根据需要通过试验进行选择。 在酶催化反应时，通常酶所作用的底物浓度远远高于酶浓度，所以酶催化反应速度随着酶浓度的升高而升高，两者成正比。 在有机介质中进行催化反应，对酶的选择不但要看催化反应的速度的大小，还要特别注意酶的稳定性、底物专一性、对映体选择性、区域选择性、键选择性等。 2 底物的选择和浓度控制 由于酶在有机介质中的底物专一性与在水溶液中的专一性有些差别，所以要根据酶在所使用的有机介质中的专一性选择适宜的底物。 底物的浓度对酶催化反应速度有显著影响，一般说来，在底物浓度较低的情况下，酶催化反应速度随底物浓度的升高而增大。当底物达到一定浓度以后，再增加底物浓度，反应速度的增大幅度逐渐减少，最后趋于平衡，逐步接近最大反应速度。 3 有机溶剂的选择 有机溶剂是影响酶在有机介质中催化的关键因素之一，在使用过程中要根据具体情况进行选择。 有机溶剂的极性选择要适当，极性过强（lgP 2）的溶剂，会夺取较多的酶分子表面结合水，影响酶分子的结构，并使疏水性底物的溶解度降低，从而降低酶反应速度，在一般情况下不选用； 极性过弱（lgP ≥ 5）的溶剂，虽然对酶分子必需水的夺取较少，疏水性底物在有机溶剂中的溶解度也较高，但是底物难于进入酶分子的必需水层，催化反应速度也不高。 通常选用2 ≤ lgP ≤ 5 的溶剂作为催化反应介质。 4 水含量的控制 有机介质中，水的含量对酶分子的空间构象和酶催化反应速度有显著影响。 要通过试验确定反应体系的最适水含量。 最适水含量与溶剂的极性有关，通常随溶剂极性的增大，最适水含量也增大；而达到最大反应速度的水活度却变化不大，都在0.5～0.6之间。 在实际应用时应当控制反应体系的最佳水活度在0.55左右。 5 温度控制 温度是影响酶催化作用的主要因素之一。酶催化的反应速度达到最大时的温度称为最适温度。 在微水有机介质中，由于水含量低，酶的热稳定性增强，所以其最适温度高于在水溶液中催化的最适温度。 要注意的是酶与其它非酶催化剂一样，温度升高时，其立体选择性降低。 6 pH值的控制 酶在有机介质中催化的最适pH值通常与在水溶液中催化的最适pH值相同或者接近