酶法合成海藻糖分析.pdfVIP

瘫士后工搏援番 耱臻套或海藻持蝣麟竞 马鸯 I}{l文摘要 海藻耩避出甄个葡萄稚分，j|噩过Gu，1一I键缝合弼成的1l：还原性戳耱。肖tl：物卸l胞处丁口I饿、 予潍、悫浚、低滚冷凉、辐射、l锈渗透{}i及商毒试粼等静秘魏追玮壤时，照内海菠糖禽麓迅速』二；}．}， 对多转又分子都具有镶护俸翊，扶积保护生命奉身。矫潍泣麓海凝糖弼群对生黝{誊iit／l：秘又努子有 良好的苛特舜性的保护作Jtj，能箕在分子生物学、医学、食晶ji．业、化投描i：姚、农业等领域有r 阔的应心前景。 以碳水化台物为底物，酶浊台成海藻糖是降低海藻糖的!|j产：成本的最有效方法，也是I-t前国际 L的研究热点。本课题立足r以淀粉雨I麦芽糖为底物，※川微生物酶合成海藻糖，由淀粉和麦芽黼 合成海藻糖掰采心静是2种不闲∞海藻耱合成酶。催他麦芽糖转他为海藻糠的黪祢为海藻耱台酶， 菠耨食酶缝匈：{；特嚣我的fll!ft,麦芽穰转纯为海藻藏，滚戆鲢一秘分f妇羲穰蒋转移瓣，nli：I骞安棼穰滟 a．1，4糖{}键转纯为a—I，l糍蓊键。庄反麻过程中，不需要有磷酸盐共存。海藻耱奇酶沟疯穆专 一性强，强作H』丁麦芽糠q-s茂海藻糖及使海藻耱生成发芽糖。淀粉转化为海藻糖魁淀粉经过商温液 trehalose 化后加入支链淀粉酶水解为炭芽寡糖，由麦芽寡糖基海藻糖台酶(maltooligosyl synthase，MTSase)年¨麦芽寡糖基海藻糖水解酶(maltooligosyltreh8lose Jl1．t邻 作JlJ可从发岿’寒糖生成海藻糖；其殷虑机制分为两步：M’rSase催化麦芽寡糖避原端的葡糖基til 瓣稳藏基瓣的tt．1，4萄旃萤键转{￡戒为n一1，l{|j}耱髂缝，驮麦芽寡糖’}戚麦芽褰糖基海藻辘，楚 一静分子内转耱萋酶。MYtlase专…窳麓麦芽寡蘩纂海藻穰瓣麦芽寡蘩萋霹海藻蒺褥静fl。1，4戆f{^ 键。褥到海藻糖和眈相赢底物少两个葡萄糖单位的麦芽寡精。两种酶循环佟聪下残物，每次扶麦芽 寡糖生成海藻糖和少两个葡萄糖荦能的麦芽寡糖。 本研究经过人域实验筛选¨J2株分别产海藻糖合酶年¨MTSase、MTHase的菌株，升对其酶学 特性和合成方法进行了研究。 l透瞧纯海藻骧会酶台或海藻糠的礴突 (1)首先比较了八株能产生海藻糖的微生物的产海藻糖台酶的能力，确定瑟奥假单胞杆萄H76 为产酶黹株，弗对其培养特性进行了研究。恶臭假单胞杆莳的摄佳培养基配方为霾芽糖3％，葡萄耥 6C．技 o．2％。熟展健发酵I．艺条仆为：发酵温度30 3％，蚩IG臁2％．酵母粉o．7％，MgS04．71t20 酵pH7．2，500ml三f『{瓶装赦蜒100ml，发酵终点52hrs。 17。8嵇。薅遴 OP．100褒35C渗透蹋藏0，5hr掰褥鹣透性耽纲魏海藻耱食簿嚣力最赢，这藏纲穗瓣1 性他纲胞酶低温速冻，真空冷凉干燥而，细胞酶的活力X有所提高(约2．6倍)，且易’r保存。 (3)对这种透性化细胞海藻糖含酶的性质系统研究的结果为：①在底物嶷芽糖浓度为10％，艇 潮胃强烈穗麴翻酶活力；④逢缝捷缳蕤海藻耱台酶戆疯秘符舞洼掇强，器鼗瓣麦势蕤转倪为海藻耱， 同时其有微弱豹求解诈蹋，生成少最豹蔼萄耱，两对箕它糖类均不起伟瑚：⑤潺性化细胞海藻糖合酶 在冷冻溅玲藏条什F保存1个月，酶活力稍有卜降，fH谯室流r保存酶活力会有较人的损火。 (4)以麦芽糖为底物合成海藻糖的E：艺研究，首先研究了麦芽糖浓度、艇麻时间与反应温度铸 I疆素列海藻糖产率的影响。结果表明：麦芽糖浓度刘海藻穗广：率影响较小；随反廊时Iiil的延匠，海藻 糖的产率逐溉增加；反应时间邈殴，海藻糖鹈产率会闵海藻糖台酶的弱承解作用蔼F降。反应澡皮媾 博士后工件报告 醇珐合