enJSRV及其IFN-τ在妊娠早期蒙古绵羊生殖器官中的表达的研究.pdfVIP

摘 要 内源性反转录病毒（endogenous retrovirus, ERV ）在数百万年前整合到哺乳动 物基因组中，它的显著特征是在大多数真核生物种系中作为遗传物质通过生殖道传 播。绵羊基因组中包含约 27 拷贝的内源性绵羊肺腺瘤逆转录病毒（endogenous jaagsiekte sheep retrovirus ，enJSRV ）序列，但 enJSRV 在绵羊妊娠早期胚胎发育过 程中的作用仍不明确。本试验利用电化学发光法测定妊娠早期蒙古绵羊第 2 、8、10、 12、14、16、19、25 和 30 d 血清中孕酮的含量；同时以上述时期的蒙古绵羊子宫 内膜、宫颈、输卵管、阴道上皮组织为材料，提取其总 RNA,根据 GenBank 中登录 的绵羊 enJSRV 及 IFN-τ 序列设计特异性的引物和探针，经 RT-PCR 扩增，采用 TaqMan 实时荧光定量 PCR 技术检测 enJSRV 及 IFN-τ mRNA 在以上各组织中 的相对表达量，就妊娠绵羊生殖组织 enJSRV 及 IFN-τ 的表达与血清中孕酮水平之 间的关系进行了研究。 电化学发光法结果显示，孕酮水平在妊娠第2 d 为 0.4 ng·mL-1,以后升高，妊 娠第 8～16 d 维持在 8.3 ng·mL-1 左右, 在妊娠第 19～30 d 孕酮水平有所下降，第 30 d 为 2.5 ng·mL-1 。RT-PCR 结果提示，enJSRV 在蒙古绵羊子宫内膜、宫颈、输 卵管、阴道上皮中均出现了单一的条带，而 IFN-τ 只在子宫内膜上出现单一条带， 且该片段与 GenBank 中登录的绵羊 enJSRV 和 IFN-τ 序列的同源性分别达 94.9% 和 96.3% 。实时荧光定量 PCR 结果显示，enJSRV 在妊娠早期（第 2 、8、10、12、 14、16、19、25 和 30 d ）不同组织间均有表达，而 IFN-τ mRNA 只表达于子宫内 膜组织。SAS 统计学软件分析得出，子宫内膜组织中 enJSRV mRNA 在妊娠第 12～ 14 d 的表达较高，第 2～10、16～30 d 的表达均低于前者，IFN-τ mRNA 仅在妊娠 的第 12～25 d 表达，第 14 d 达其峰值，第 30 d 就不能检出；子宫颈组织中 enJSRV mRNA 在妊娠的第 10 d 表达量最低，之后升高，第 30 d 达到最大表达量；输卵管 组织中 enJSRV mRNA 的表达于妊娠第 10 d 较低，之后升高，第 25 d 表达量最高； 阴道上皮组织中 enJSRV mRNA 于妊娠第 10 d 和 19 d 的表达量相对较高，第 30 d 的表达量较低，且差异都极显著（P0.01）。以上结果提示，enJSRV mRNA 的表达 在子宫内膜、子宫颈、输卵管和阴道上皮被检测到，说明 enJSRV 在母羊生殖道上 皮细胞大量且特异性表达。子宫内膜组织中 enJSRV mRNA 的表达与外周血孕酮含 量及 IFN-τ 的变化呈正相关，为研究 enJSRV 在绵羊妊娠早期可能发挥的生殖生物 学作用提供了理论数据。 关键词：内源性绵羊肺腺瘤病毒；干扰素- τ；孕酮；相对表达量；实时荧光定量 PCR； Expression of enJSRV and IFN-τ in Reproduction Organs of Mongolian Sheep in Early Pregnancy Abstract ERV is derived from integration events during the evolution of ancient retroviruses into mammalian genomes over many million