大鼠肺间质纤维化模型中肺泡灌洗液里血管紧张素Ⅱ的水平测定及其意义.pdfVIP

中文摘要 前言 肺间质纤维化是多种疾病造成的肺部胶原沉积增多。其发病机制 复杂，治疗效果较差。生理状态下，AT—II主要在肺内形成，目前源 于其他器官的证据证明AT—lI可以刺激成纤维细胞增殖并合成胶原增 多，这种作用是其1型受体介导的复杂细胞内信号传导所引发的。 本实验是检验肺纤维化模型中肺泡灌洗液里AT-II水平是否升高。 实验材料 博来霉素A。 生理盐水 氯胺酮 PBS AT—II检沏0试齐U盒 雄性lJ}istar大鼠 注射器 手术器械 细胞计数板 显微镜 离心机 高速低温离心机 干燥机 显微照相机 实验方法 药1天组，3天组，7天组，l4天组，28天组和相应对照组。 氯胺酮腹腔内注射麻醉后，气管内注射博来霉素(5mg／kg，溶于生理 药后l天，3天，7天，l4天，28天处死相应的大鼠及对照组大 鼠。术中用肝素生理盐水冲洗肺脏至发白。灌洗右肺共收集约20ml 灌洗液，显微镜下计数细胞，高速低温离一C，机制各灌洗液上清，留右 肺备用。 2．AT—II检钡4 试剂盒由北方生物技术研究所提供，按说明使用。 3．肺泡灌洗液(BALF)中细胞计数和细胞分类计数 0 在Neubauer记数台上记数灌洗液细胞总数，以1水l6／表示。 余液在4℃，1200转／分状态下离心1O分钟。离心沉淀细胞用生 0 理盐水冲洗并调整细胞数为1术l 0 6／毫升，取5 ul，用特制的 片上，冷风吹干。玻片置无水乙醇中固定，HE染色后记数细胞。 4．眦染色 细胞涂片经苏木素染色，70％盐酸酒精分化，流水冲洗，伊红 染色，乙醇梯度脱水，二甲苯透明，中性树胶封片，光镜下观察并摄 像。 实验结果 l，肺泡灌洗液中组胞总数在给药后逐渐增加，于第3天达到最高峰 值，随后逐渐下降，至28天时细胞总数降到最低点。分类计数中： 肺泡巨噬细胞数值于给药后逐渐下降， 3天时下降到最低点，随后 数值逐渐地上升，到船天时基本可纠恢复到给药前的水平。灌洗液 中性粒细胞数值的变化正好和巨噬细胞的变化相反，其数值在给药后 第l天即开始增加，到第3天的时达数值高峰，后急速下降，第7 天以后下降的趋势减缓，至船天时可基本恢复正常。淋巴细胞记数 曲线似中性粒细胞，但到28天时其数值仍然不能恢复到对照组水 平。嗜酸细胞计数呈双峰变化，分别予给药后7天和28天达峰， 坦是第一峰高于第二峰。以上结果与文献报道结果相似。 2．各组大鼠肺病理切片(见图) 3．肺泡灌洗液中AT—II水平测定结果：各个给药组与对照组的比较分 析见表i，结果是各组与对照组间均无显著统计学差异。给药组问 两两比较亦显示各组间无显著统计学差异。 讨 论 目前多篇文献证明AT_Ⅱ通过盯I受体引起成纤维细胞增殖及 数及其动态变化符合文献报道，并且有病理证据充分证明模型制作藏 样的结果和Marshall等实验结论相悖。 分析原因可能如下：本实验已经证实肺泡内炎症细胞增多。增多 的炎症细胞有可能释放大量的蛋白酶，从而水解AT-2使肺泡内该物 质水平降低。但该假设并没有实验的证实，仅是从理论上推测有这种 可能，需进一步实验证实。 纤维化是发生在肺脏间质，结合本实验中肺泡中姐一2水平没有 升高，故可能肺脏内AT-2水平升高主要发生在肺脏问质或者是血液 循环中。 该实验盼样本较，j＼，故其检验效力人人的减弱。实验中采用放射 免疫原理检测AT-2水平，因为它的测量数值差异很大，亦减弱了该 实验的检验效力。 结 论 本文首次证明Blco致肺纤维化模型的肺泡灌洗液中朋Ⅺ水平 没有升高。但是