5 Aza dC对奶牛乳腺上皮细胞PPARγ表达的影响.pdfVIP

河南农业科学，2014，43(11)：126—131 JournalofHenanAgriculturalSciences 5一Aza—dC对奶牛乳腺上皮细胞 PPAR7 表达的影响 边艳杰，王 杰，王春梅 ，李庆章 (东北农业大学，黑龙江 哈尔滨 150030) 摘要 ：为阐明DNA 甲基化对奶牛乳腺泌乳功能调控的机制，研究 了甲基化抑制剂 5一氮杂一2一脱 氧胞苷(5一Aza—de)对奶牛乳腺上皮细胞 中PPARy基 因启动子甲基化状态及其表达的影响，以 体外培养的奶牛乳腺上皮细胞为模型，采 用0．1、0．5、1．0、5．0tlmol／L的 5一Aza—dC对奶牛乳腺 上皮细胞进行处理 ，用 EpiQuikTMDNAmethyltransferaseassay试剂盒进行 甲基转移酶活性检测 ， 采用CASY细胞分析仪检测细胞活力和增殖 能力，利 用亚硫酸氢盐测序 (BSP)技 术检测 了 PPARy启动子的甲基化特征 ，qRT—PCR法检测 PPARymRNA表达的变化，Westernblot检测 PPAR7蛋 白表达的变化。结果显示：与空白对照组相 比，0．1tlmol／L的5一Aza—dC对奶牛乳腺 细胞生长无毒性，处理 96h甲基转移酶活性极显著降低 ，奶牛乳腺细胞的PPARy基 因启动子甲 基化程度降低 ，PPAR7表达升高。表明5一Aza—dC可降低奶牛乳腺细胞 中PPAR)，启动子 区域 的甲基化程度 ，促进 PPAR7表达。 关键词 ：5一氮杂一2-脱氧胞苷；奶牛乳腺上皮细胞 ；PPAR7基因；DNA 甲基化 中图分类号：$823．9 文献标志码 ：A 文章编号：1004—3268(2014)11—0126—06 TheEffectof5-Aza一2一DeoxycytidineontheExpressionof PPAR7inDairyCow M ammaryEpithelialCellsinvitro BIANYan—jie。WANGJie，WANGChun—mei，LIQing—zhang (NortheastAgriculturalUniversity，Harbin150030，China) Abstract：Thisexperimentwastoexploretheinfluencesof5一aza一2一deoxycytidine(5一Aza-dC)onthe methylation statusofpromoter region ofPpA geneand itsexpression in dairy cow mammary epithelialcells(DCMECs)．DCMECswereculturedinvitroandtreatedwith0．1，0．5，1．0，5．0~mol／L ． 5-Aza-dC，methyltransferaseactivitywasmeasuredbyEpiQuikwMDNA methyltransferaseassaykit； CASY~一technologywasappliedtomeasurecellviabilityandproliferation；bisulphitegenomicsequencing PCR(BSP)techniquewasappliedtOdetectthemethylationstateofthepromoterregionofPPA鼬 gene inDCMECs；qRT-PCRwasappliedtodetectPPA脚 mRNA expression；theproteinexpressionlevelof PPAR7wasdeterminedbyWesternblot．Resultsshowedthat0．1t~mol／L5-Aza—dChadnosignifi