A族链球菌感染巨噬细胞激活TLR2及TLR4表达的研究.pdfVIP

山西医科大学学报，2015年1月，第46卷 第 1期 · 21 · A族链球菌感染巨噬细胞激活TLR2及TLR4表达的研究 王海欣 ，陈继科 ，郭 宜 ，时建华 ，吴景华 (唐山市中医医院口腔科，唐山 063000；唐山市协和医院口腔科；河 北联合大学附属医院；通讯作者，E-mail：tswujinghua@163．con) 摘要： 目的 通过分析A族链球菌 (GAS)感染巨噬细胞后TLR2及 TLR4的活化情况，以此来研究 GAS感染后产生炎症反应 的信号通路，为GAS感染巨噬细胞的预防及治疗奠定基础。 方法 GAS及热灭活 GAS以感染复数 (MOI)为 100：1感染小鼠 巨噬细胞 RAW264．7细胞后 1，2，4，6h，提取总 RNA采用real—timePCR技术检测T1_1~2／4的表达情况；同时 GAS及热灭活的 GAS注射C57小鼠腹腔，24h后分离腹腔巨噬细胞并提取蛋白，利用Westernblot及免疫荧光技术对TLR2和TLR4的表达量进 行分析。 结果 巨噬细胞表面TLR2及TLR4在GAS感染后 1h活化不明显 ，但作用2h后 11LR2及TLR4表达明显升高(P 0．05)，4h时达到高峰，6h后开始降低。热灭活 GAS感染巨噬细胞TLR2的表达与 GAS感染 比较未见到统计学差异(P O．05)，但巨噬细胞表面TLR4的表达与GAS组具有明显的差异 (P0．05)。 结论 GAS感染小鼠巨噬细胞可同时激活TLR2 及TLR4受体，其中TLR4受体主要通过位于GAS表面及其分泌的活性蛋白成分激活 ，TLR2受体则主要由其菌体成分进行活化。 关键词： GAS； 巨噬细胞； TLR2； TLR4 中图分类号： R392．12 文献标志码： A 文章编号： 1007—6611(2015)Ol—oo21—04 DOI：10．13753／j．issn．1007—6611．2015．01．O06 StudyontheactivationofTLR2andTLR4ingroupA streptococcus-infectedmacrophages WANGHaixin，CHENJike，GUOYi，SHIJianhua，WUJinghua3(DepartmemofStomatology，TangshanCityHospitalofTradi— tionalChineseMedicine，Tangshan063000，China；DepartmentofStomatology，TangshanXieheHospital；DepartmentofStomatology， HebeiUnitedUniversityAffiliatedHospital；Correspondingauthor，E—mail：tswujinghua@163．con) Abstract： ORctive ToinvestigatetheexpressionofTLR2andTLR4ingroupAstrep：Lococcus(GAS)-infectedmacrophagesandto explorethepathwayinGAS-inducedinflammationforprovidingapotentialnew wayinprev‘entionandtreatmentofGAS—inducedinfec— tion． Methods ThemacrophageswereinfectedbyGASandheat-inactivatedGASatMOIof100：1．Afterinfectionfor1，2，4，6h， thetotalRNAwasseparatedandtheexpressionofTLR2orTLR4wasidentifiedbyreal-timePCR．Theperitonealmacrophagesinfected byGASorheat—inactivatedGASfor24hwereseparatedandtheactivationofTLR2orTI_R4wasanalyzedbyimmunofluorescenceand Westernblot． Results TLR2andTLR4expressionlevelsshowednoobviouschangesinGAS-infectedmacmphagesat1h，nadsig— nificantlyincreasedat2h(P0．05)，peakedat4handd