A族链球菌（GAS）Fba蛋白单克隆抗体对应表位核心氨基酸的确定.pdfVIP

A 心氨基酸 · 分子与细胞免疫学 · A族链球菌 (GAS)Fba蛋 白单克隆抗体对应表位核心氨基酸 的确定① 郭奕阳 马翠卿 魏 澎 王秀荣 冯惠东 阎婉依 魏 林 (河北医科大学基础医学院免疫教研室，石家庄050017) 中国图书分类号 R392．1 文献标识码 A 文章编号 1000-484X(2009)1l059-05 [摘 要] 目的：对A族链球菌 Fba蛋白McAb2所对应的表位进行定位。方法：以初步定位的表位区段为线索合成三段 重叠多肽，dot-ELISA检测 McAb2与合成肽的亲合力，并以McAb2为靶分子，利用噬菌体随机七肽库进行亲和筛选 ，用竞争 ELISA鉴定阳性克隆。结果：dot—ELISA检测结果表明Fba】 ¨2肽段与McAb2的结合能力最强。经过3轮亲和筛选后 ，随机挑选 20个噬菌体克隆，竞争ELISA对其与MeAb2的亲和力做检测，其中 12个克隆显示较强的阳性结果。阳性克隆 DNA测序，与 Fba基因第 100位氨基酸至 l10位氨基酸中ITPDL同源性较高。结论：通过dot-ELISA将A族链球菌 Fba蛋白McAb2对应的表 位定位于 100～112位氨基酸，结果同噬菌体随机肽库筛选的核心氨基酸位置吻合。为进一步研制表位肽疫苗、研究 Fba蛋白 及其单克隆抗体的生物学功能奠定了基础。 [关键词] A族链球菌；Fba蛋白；单克隆抗体 ；表位；噬菌体肽库 DeterminationofpredominanceaminoacidsspecificforM cAb2toFbaprotein of GAS GUO ，MACui-Qing ，WEI ，2g，WangXiu-Rong， ，g!Hui—Dong，YAN ％n— ，WEILin．DepartmentofIm— munology，BasicMedcialCollege，ttebeiMedcialUniversity，Shfiiazhuang050017，China A【bstractJ Objective：ToidentifymonoclonalantibodyMcAb2recognizingepitopeofFbaofGAS．Methods：Theovedappedpeptides weresynthesizedand hteirabilitiestobind McAb2weredetectedbydot—ELISA．ThepredominanceaminoacidsspecificforMcAb2 were screenedusingphage7 peptidelibrary．Results：Theresultby dot·ELISA analysisdemons~atedthathte synthetizedpeptide，amino-acid residues100—112 ，couldbindMcAb2wiht l-righaffinity．ThepredominanceaminoacidsspecificforMcAb2were1TPDL，whichwaslocatedin 100-110 aaofFbabypanningwiht phage7peptidelibrary．Conclusion：ThedomainandthepredominanceaminoacidsofFbarecognizedby McAb2isdetermined．Th eresultswouldcontributetohteresearchofhteroleofPoaonhtepathogenicmechanism ofGAS，hteidentificationof functionofMcAb2。nad山edevelopmentofepitope-peptidevaccine． 1KeywordsJ GroupAStreptococcus；Fbaprotein；Monoclonalnatibody；Epitope；Phagepeptidelibrary A族链球菌 (GroupAstreptococcus，GAS)是一种 中具有很高的同源性。以往对 Fba蛋 白的研究表 明 常见致病菌，可引起严重的侵袭性感染及感染后变 其有 良好 的免疫原性并可诱发保护性免疫应 态反应性疾病。临床上存在着反复感染及难以治愈