利用实时荧光定量一聚合酶链反应方法检测粪便标本中的伤寒沙门菌.PDFVIP

疾病监测2013年 5月 31日第28卷第 5期DISEASESURVEILLANCE，May31，2013，Vo1．28，No．5 ◇技 术 与方 法 ◇ 利用实时荧光定量 一聚合酶链反应方法检测 粪便标本中的伤寒沙门菌 肖燕 ，任志鸿 ，樊粉霞 ，阚飙 ，祝丽玲 ，闫梅英 摘要： 目的 建立针对粪便标本中伤寒沙门菌的检测方法，评价该方法的特异性、敏感性及检测下限，以提高感 染人群粪便标本中伤寒沙门菌的检出率。方法 根据伤寒沙门菌特异基因STY1633设计特异性引物，优化反应条 件，建立实时荧光定量一聚合酶链反应 (real—timefluorescentquantitativepolymerasechainreaction，qPCR)反应体系。 利用92株常见的非伤寒病原菌及44株伤寒沙门菌的染色体DNA评价该方法的特异性和灵敏性，并对伤寒沙门菌 的粪便模拟标本进行检测下限评价，同时利用 l0份伤寒患者粪便标本及48份其他病原所致发热和／或伴腹泻的 患者粪便标本进行特异性、敏感性验证。结果 利用本方法检测的伤寒沙门菌纯菌及伤寒患者标本均扩增阳性， 其余 的非伤寒沙门菌、致腹泻的其他5种肠道致病菌及引起发热症状的8种常见非肠道病原菌纯菌及相应患者标 本均扩增阴性。在对纯伤寒沙门菌DNA检测中，qPCR法的最低检测限为500f反应，相当于97个拷贝／反应。 以粪便模拟样品提取 DNA为模板 的检测中，增菌前检测下 限达 10cfu／g，增菌后可达 50cfu／g。结论 基于 STY1633基因的实时荧光定量 PCR方法在检测粪便中的伤寒沙门菌中具有很好的特异性、灵敏度，为伤寒沙门菌 的快速诊断及某些不明原因发热及腹泻症状的病原初步鉴定提供了新的简便型手段，对于伤寒的早期诊断及预防 控制提供了技术支持。 关键词： 伤寒沙门菌；实时荧光定量一聚合酶链反应；伤寒 中图分类号：R516．3 文献标识码 ：A 文章编号：1003—9961(2013)O5一o407—05 DetectionofSalmonella typhiin stoolsampleswith real-timefluorescentquantitativepolymerasechain reaction XIAOYan’，REN Zhi—hong，FANFen—xia，KANBiao，ZHULi—ling，leANMei—ying．1．InstituteforCommunicable DiseasePreventionandControl，ChineseCenterforDiseaseControlandPrevention，Bejiing102206，China；2．Schoolof PublicHealth，JiamusiUniversity，Jiamnsi154007，Heilongjiang，China Correspondingauthors：YAN Mei-ying，Email：yanmeiying@ icdc．cn；ZHU 一ling，Email：zhuliling2006@yahoo．com．cn Abstract： Objective Toestablishareal—timefluorescentquantitativepolymerasechainreaction (qPCR)assayto detectSalmonellatyphiinstoolsamples．M ethods PrimersweredesignedbasedonthesequenceofSTY1633，specific geneofS．typhi，forqPCR assay．Thespecificity and sensitivityoftheqPCR assay established wereevaluated and verifiedbydetecting92strainsofcommonpathogensotherth