黄芩素对宫颈癌细胞凋亡的影响.pdfVIP

广东医学 2015年2月第36卷第3期 GuangdongMedicalJournal Feb．2015．Vo1．36．No．3 · 345 · 黄芩素对宫颈癌细胞凋亡的影响水 卢科莲 ，喻小兰 ，夏纪毅。，张宇骄 ，毛熙光 四)ll省泸州市妇幼保健院妇产科 (646000)；泸州医学院附属中医医院妇产科(四川泸州 646400)；泸州医学院 药物与功能性食品研究中心(四川泸州646000)；泸州医学院附属医院妇产科 (四川泸州646000) 摘【要】 目的 观察不同浓度的黄芩素干预宫颈癌HeLa细胞后细胞迁移及细胞周期的变化，观察细胞培养 基中具有活’|}生的金属基质蛋白酶一2(MMP一2)、金属基质蛋白酶9(MMP一9)的变化，及MMP一2、MMP一9、金属 蛋白酶组织抑制剂2(TIMP2)、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、B细胞淋 巴瘤／白血病 一2(Bcl一2)相关x蛋白 (Bax)、Bcl一2mRNA及蛋白水平表达的变化。方法 体外黄芩素干预 Hela细胞株24h，分不含黄芩素的无血清 DMEM高糖培养基培养的细胞为空白对照组，无血清DMEM高糖细胞培养基 中加入终浓度为 100p,mol／L的黄芩 素为 100ixmo]／L组，无血清DMEM高糖细胞培养基中加入终浓度为200txmol／L的黄芩素为200Ixmol／L组，共3 组。镜下观察各组细胞形态及数量的变化、细胞迁移实验检测细胞迁移的改变、流式细胞技术法检测细胞周期发 生的变化 、RT—PCR法及 Western blot法检测 MMP一2、MMP一9、TIMP2、CyclinD1、Bax、Bcl一2mRNA及蛋 白水平 的表达变化。结果 黄芩素干预24h后，与空白对照组比较，两干预组细胞周期G 期受阻滞，阻滞程度与黄芩素 干预浓度一致(P0．05)，细胞迁移受抑制，随着黄芩素浓度逐渐增加，迁移距离逐渐减少(P0．05)，MMP一2、 MMP一9活性受到抑制 ，抑制程度与黄芩素浓度呈正相关 (P0．05)，MMP一2、MMP一9、CyclinD1、Bcl一2的 mRNA及蛋 白表达随黄芩素干预浓度增加 ，呈逐渐降低的趋势 (P0．05)，TIMP2、Bax的 mRNA及蛋 白表达趋 势随黄芩素浓度增加而逐渐增强(P0．05)。结论 黄芩素干预宫颈癌HeLa细胞，通过阻滞细胞周期 G 期，抑 制MMP一2、MMP一9活性，上调TTMP2、Bax的表达，下调MMP一2、MMP一9、CyclinD1、Bcl一2的表达，促进 HeLa 细胞 的凋亡。 【关键词】 黄芩素；宫颈癌HeLa细胞；金属基质蛋白酶一2；金属基质蛋白酶一9；金属蛋白酶组织抑制剂2； 细胞周期蛋 白D1；Bax；Bcl一2 黄芩素是中药黄芩的最主要成分，有研究表明其 预的最佳时间点，在此时问点，用不同浓度黄芩素干预 具有抗炎、抗氧化 、免疫调节以及抑制肿瘤等作用…， 宫颈癌细胞，观察细胞 TIMP2、Bax、Bcl一2表达的变 并且黄芩水提物可以明显抑制宫颈癌 HeLa细胞的体 化 ，及其与促凋亡的关系，为治疗宫颈癌，阻止宫颈癌 外生长，与药物的作用时间和浓度呈正向关系 。细 的进行性发展提供新的治疗思路。 胞周期和癌变是相互关联的，而细胞周期 的失调是细 1 材料与方法 胞过度增殖而致癌变产生的重要原 因 。肿瘤 中基质 1．1 材料 HeLa细胞株 由泸州医学院附属医院医学 金属蛋 白酶 (MMPs)和基质金属蛋 白酶组织抑制物 实验中心馈赠，DMEM高糖培养基购于 Hyclone公司， (TIMPs)之间的平衡失调是肿瘤进展 的一个重要因 黄芩素购于ChengduMustBio—Techology公司，细胞周 素 。细胞周期蛋 白D1(CyclinD1)是与细胞周期密 期检测试剂盒购于南京凯基公司，RIPA(强)裂解液及 切相关的关键因子，OBA等 研究表明CyclinD1在肿 5X上样缓冲液购于碧云天公司，DNAMarker、RT— 瘤中高表达，并且向恶性表