人教选修三DNA的重组技术概述.pptVIP

一.基因工程概念: 通俗地说,就是按照人们的意愿,把一种生物的某种基因提取出来,加以修饰改造,然后放到另一种生物的细胞里,定向地改造生物的遗传性状. 磷酸二酯键 举例： 1假如目的基因导入受体细胞后不能复制将怎样？ 1、在基因工程中，切割运载体和含有目的基因的DNA片段，需使用 同种限制酶 B.两种限制酶 同种连接酶 D. 两种连接酶 2、不属于质粒被选为基因运载体的理由是 A、能复制 B、有多个限制酶切点 C、具有标记基因 D、它是环状DNA * * * * * (又叫基因拼接技术或DNA重组技术) 实质 结果 基本过程 操作水平 操作对象 操作环境 基因工程的别名 基因拼接技术或DNA重组技术 生物体外 基因 DNA分子水平 人类需要的基因产物 剪切 → 拼接 → 导入 → 表达 基因重组 基因工程的概念 举例: 基因工程培育抗虫棉的简要过程： 普通棉花(无抗虫特性) 苏云金芽孢杆菌 提取 抗虫基因 加以修饰改造 棉花细胞(含抗虫基因) 棉花植株(有抗虫特性) 上述培育抗虫棉的关键步骤是什么？ 提取 导入 加以修饰改造 导入 解决培育抗虫棉的关键步骤需要哪些工具？ 基因工程中的关键步骤： 关键步骤一： 抗虫基因从细胞内提取出来 关键步骤二： 抗虫基因与运载体DNA连接 关键步骤三： 抗虫基因导入受体(棉花)细胞 解决其关键步骤需要哪些工具？ 步骤一的工具： 步骤二的工具： 步骤三的工具： 基因的剪刀: 限制酶 基因的针线: DNA连接酶 基因的运载工具: 运载体 1.1 DNA重组技术的基本工具 主要是从原核生物中分离纯化出来 1、来源： 一、 “分子手术刀” —限制酶 2、常见种类： 如： EcoRI 限制酶、SmaI限制酶 　　专一性，识别双链DNA特定的核苷酸序列，切割特定部位（核苷酸之间的磷酸二酯键） 3、特点： T 1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 A 4、限制酶识别序列特点： 　　识别的序列大多数由6个核苷酸组成，且都有一条中心轴线，中心轴线两侧双链DNA上的碱基是反向斜对称排列的 5、切割ＤＮＡ的结果： 产生两种末端 黏性末端 平末端 　　当限制酶从识别序列的中心轴线两侧将DNA两条链分别切开时，带有几个伸出的核苷酸，它们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端 当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时是平整的，这样的切口叫平末端。 限制酶 举例： 大肠杆菌(E.coli)的一种限制酶能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开 　SmaI限制酶的一种限制酶能识别GＧＧＣＣC序列，并在G和Ｃ之间切开 GAATTCCGTAGAATTCGGATT 尝试写出下列序列受EcoRI限制酶作用后的黏性末端 CTTCATGAATTCCCTAA GAAGTACTTAAGGGATT CTTAAGGCATCTTAAGCCTAA CTTCATG AATTCCCTAA GAAGTACTTAA GGGATT GGCATCTTAA AATTCCGTAG 二、 “分子缝合针” —— DNA连接酶 1、根据酶的来源： 分为 E·coli DNA连接酶 T4 DNA连接酶 2、连接部位： 　能将切开的ＤＮＡ双链“缝合”起来，恢复被限制酶切开的磷酸二酯键。 3、具体连接部位： E·coli DNA连接酶： T4 DNA连接酶： 只能连接: 黏性末端，不能连接平末端 　既能连接黏性末端， 又能连接平末端（但效率较低） DNA连接酶与DNA聚合酶的异同点： 都能使两个核苷酸之间形成磷酸二酯键 相同点： 不同点： 1）DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核酸片段上，形成磷酸二酯键；而DNA连接酶是在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键 2）DNA聚合酶需要以一条DNA链为模板，将单个核苷酸连接成一条互补链；而DNA连接酶不需要模板 2、作为载体没有切割位点将怎样？ 3、目的基因是否进入受体细胞，你如何察觉？ 4、如果载体对受体细胞有害将怎样? 若导入后不能复制，那么将在细胞增殖中丢失 若没有切割位点，目的基因不可能插入 若载体上有标记基因，在载体进入受体细胞后，就可通过标记基因的表达来检测 若有害，将影响受体细胞新陈代谢，那么转入的目的基因也无立足之地。 二、 “分子运输车” —— 载体 1、作为载体的必备条件： 1、具有能自我复制的能力 2、有一个或多个限制酶的切割位点 3、带有标记基因 4、对受体细胞无害等等 1）质粒（最常用）： 2、常用的载体： 2）λ噬菌体的衍生