降纤酶制备工艺及质量标准的研究.pdfVIP

摘要 以中国长白山白眉蝮蛇蛇毒为原料，根据蛇毒的生物学特征，采用不同方法对 蛇毒的真伪进行鉴别，并对降纤酶分离纯化的生产工艺以及质量标准进行了研究。 15Q，sourse15S，sourse 采用三种不同介质sourse 30S进行离子交换色谱分 离，能有效除去杂蛋白，保留活性组分。其中Sourse30具有低压系统分辨率很高、 6。FastFlow三种亲和介质分离，得到的色谱图谱基本一致。为一个峰， sepharose 对降纤酶的分离能力无差别，考虑到生产中的成本，选用价格比较低的 15PHE，Sourse15ETIt， Heparin—SepharoseCL-6B。将得到降纤酶粗品，采用Sourse Sourse 15IS0三种介质进行疏水分离，各得到两个峰。活性检测表明，第二个峰为 15PHE活性组分的活性比另外两种介质得到的活性组分高。在此基 活性峰，Sourse 30，Superdex75分离，得到分离峰相 础上采用凝胶介质Superdex200，Superdex 75具有低非特异性吸附，提高回收 似，都是一个具有活性的洗脱峰。其dPSuperdex 率，分辨率、选择性高。 经过介质筛选和工艺参数的小试研究，对工艺生产进行放大。最终经过离子交 换，亲和色谱，经过滤除菌，巯水色谱分离，再超滤，凝胶色谱分离。得到的活性 峰，经高效液相色谱分析，其纯度达99．096以上，SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳显示为一 条单成份带，分子量为36500。该分离纯化方法经过实际生产应用，具有工艺过程简 单，在生产过程中除去了神经毒、出血毒及其它有害毒素，与国内同类产品比较， 具有降纤酶纯度高，副作用小，产品质量稳定等优点。 参照2000年中国药典，对降纤酶理化性质进行分析与检测，并进行稳定性考察。 经观察和检测，在36个月内稳定，本品的有效期定为2年。为此，建立本产品的质量 控制指标。与目前临床使用的t-PA，尿激酶，链激酶等溶栓制剂相比，蛇毒纤溶酶 有其优点，可望成为临床联合应用溶栓制剂或作为替代溶栓药物。 关键词：长白山白眉蝮蛇毒；降纤酶：制备工艺；分离纯化；质量标准 Abstact tOits character,snakevenomof was Accordingbiologlcal Agkistrodonhalys identifieddifferentmethods．Inthis and and by paper,theseparationpurificationprocess standardofdifibrasfromsnakevenom werestudied． quality ofAgkistrodonhalys Thesnakevenomwas throu曲ion mediasourse1 separated exchange 5Q，sourse 30S．TheactiveeluteWasretainedandmostother wereremoved． 15Sandsourse proteins 30Swas and resolutionin elutefrom【 Thesourse cheaperhigher low—pr