产乳酸菌素乳酸的筛选及对对虾防腐效果的初步研究.pdfVIP

产乳酸菌素乳酸菌筛选及对对虾防腐效果的初步研究 摘 要 本研究采用稀释涂布法对湛江南海海域采集的 10 种海洋动物肠道进行乳酸菌分 离及多相分类鉴定；利用牛津杯打孔法筛选具有抗菌活性的乳酸菌，并通过排除菌株 发酵液有机酸、过氧化氢物的抑菌作用，以及蛋白酶敏感性实验筛选出产乳酸菌素的 乳酸菌。对产乳酸菌素乳酸菌的生物学特性及其乳酸菌素的性质进行研究，用浸泡保 鲜方式将乳酸菌素粗品应用于南美白对虾的防腐保鲜，并对保鲜防腐效果进行初步评 价。主要结果如下： （1）10 种海洋动物肠道中共分离出 159 产生溶钙圈的疑似乳酸菌，进而从中初 筛出 43 株具有抗菌活性的乳酸菌。经形态学和生理生化特性鉴定，43 株乳酸菌分别 属于乳杆菌属（Lactobacillus ）、乳球菌属(Lactococcus) 、肠球菌属(Enterococcus) 、明 串株菌属(Leuconostoc) 、片球菌属(Pediococcus)5 个菌属。从中挑选出 13 株具有抑菌 谱广、抑菌能力强并具有菌属代表性的菌株，进行 16S rRNA 基因序列鉴定，其中坚 强肠球菌( Enterococcus durans) 2 株，乳酸乳球菌乳酸亚种（Lactococcus lactis subsp.lactis ）2 株， 融合魏斯氏菌 （Weissella confusa）1 株，戊糖乳杆菌(Lactobacillus pentosus )2 株，格氏乳球菌（Lactococcus garvieae ）3 株，柠檬色明串株球菌（Leuconostoc citreum ）2 株；戊糖片球菌(Pediococcus pentosaceus ) 1 株。 （2 ）从43 株具有抗菌活性的乳酸菌中挑选出 39 株具有抑制两种或两种以上指示 菌生长的乳酸菌，对其浓缩发酵液进行有机酸、过氧化氢物排除实验，筛选出 2 株疑 似产乳酸菌素菌株 ZH-54、LY-87，并对其进行蛋白酶敏感性实验。菌株 ZH-54 经胰 蛋白酶、蛋白酶 K 处理后的发酵液对金黄色葡萄球菌的抑菌圈比未处理的抑菌圈明 显变小，菌株 LY-87 经木瓜蛋白酶、蛋白酶 K 处理后的抑菌圈也明显变小，表明这 2 株菌都能产生具有抑菌活性的蛋白或多肽类物质，即乳酸菌素。 （3 ）根据形态学、生理生化特性实验以及 16S rRNA 序列同源性分析，确定菌 株 ZH-54 为坚强肠球菌（Enterococcus durans ），其 16S rRNA 序列在 GeneBank 的登 录号为JX258806 ；菌株LY-87 鉴定为乳酸乳球菌亚种（Lactococcus lactis subsp. lactis ）， 登录号为 JX258807 。 （4 ）对菌株ZH-54、LY-87 所产乳酸菌素 Bact.54 、Bact.87 的生物学特性研究表 明，Bact.54 有相当好的热稳定性，在 100℃处理 15 min 活性下降 12.14 %，121 ℃处 理后活性仅下降 18.50%；而Bact.87 热稳定性较 Bact.54 差，经 100℃处理 15min 后， 抑菌活性下降 39.70 %，121℃处理后，抑菌活性下降了 61.76 % 。pH 对 Bact.54 、Bact.87 的影响十分显著，随着pH 的升高，Bact.54 、Bact.87 的抑菌活性均逐渐下降，当pH I 等于或大于 7.0 时抑菌活性完全丧失。Bact.54 对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌均有抑 菌活性，Bact.87 只对革兰氏阳性菌有抑菌作用。 （5 ）Bact.54 、Bact.87 对南美白对虾防腐保鲜效果的研究表明，乳酸菌素 Bact.54 、 Bact.87 对南美白对虾均具有明显的保鲜作用，但 Bact.54 的防腐保鲜效果要优于 Bact.87 ，Bact.54 处理组的对虾的保质期比对照组延长了 2-3 天，而用 Bact.87 处理可 延长 1-2 天；Bact.54 、Bact.87 对对虾中人工接种的金黄色葡萄球菌有较好的抑制效 果。因此 Bact.54 、Bact.87 均可在短期内延缓对虾的腐败，延长货架期，作为水产品 的生物防腐剂，具有很大的开发潜力。 关键词：乳酸菌，乳酸菌