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浙江工商大学硕士研究生论文 产共轭亚油酸丙酸菌的分离及发酵条件的研究 摘要 共轭亚油酸是一种非常重要的不饱和脂肪酸，可看作亚油酸的衍 生物。具有抗癌、抗粥状动脉硬化、提高机体免疫力等颇为引人注意 的生理功能，广泛地应用于医药、食品和饲料等工业。国外已经研究 了采用化学方法以及微生物转化法获取共轭亚油酸的多种工艺路线。 近年来我国在化学方法以及微生物发酵法生产共轭亚油酸方面已开 始有少量的研究报道。 本论文对丙酸菌生物转化法生成共轭亚油酸展开研究，主要包括 产共轭亚油酸的丙酸菌菌种筛选，丙酸菌转化条件和高密度培养的研 究，以及混合微生物转化工艺的研究等。 本文从青贮饲料和干酪中分离得到的十几株疑似丙酸菌，对它们 进行产共轭亚油酸能力和发酵产物丙酸的筛选，最终得到3株产共轭 亚油酸的丙酸菌，其中一株产共轭亚油酸较高的菌株Hz—P．65(共轭 亚油酸产生能力15．743ug，mL)，采用细菌形态学、电镜透射与扫描 图像分析、生理生化等研究，初步鉴定该菌株为一株费氏丙酸杆菌。 该菌株丙酸产量为9．649／L，丙酸与乙酸之比接近3．5：l。 对不同培养基和培养条件进行了初步优化得出：培养基为MRs培 养基，接种量为Io％，培养温度为30℃，在培养之初加入LA，底物 LA浓度为l000 u∥mL，转化时问为120h，添加吐温-80作分散剂，LA 浙江工商大学硕士研究生论文 u 和SO的比为l：20时，CLA的最高产量达到40．033 g／mL。 研究了发酵技术对丙酸菌高密度培养及转化合成cLA的影响。 pH-s协t培养技术一定程度上克服了因pH值下降、酸积累而引起的抑 制作用，菌体密度较高，共轭亚油酸产量也相对提高。丙酸菌在pH6．O 进行pH—s诅t培养，菌体密度可达12．42，cLA产量最高达 45．801p咖L。在此基础上，进行了间歇补料和连续补料培养，间歇 连续补料培养菌体oD值最大达17．35，CLA产量最大值达 55．867斗∥mL。 由于丙酸菌和乳酸菌之问存在互生作用，且这两种菌均能转化合 成共轭皿油酸，所以，我们对丙酸菌和乳酸菌混合培养转化合成共轭 亚油酸进行了初步研究。主要从不同温度和不同接种比例考虑其对混 合培养的影响，确定了混合培养的最适培养温度30℃，最佳接种比 例2：1和1：3。 关键词 共轭亚油酸，丙酸菌，生物转化，高密度培养，混合培养 浙江工商大学硕士研究生论文 SCREENING OFPROPl0NIBACTERIASTRAIN PRODUCINGCONJUGATEDLINOLEICACIDAND STUDYoNIT’SFERMENTATION ABSTRACT linoleic anoctadeca·dienoic Conjugatedacid(CLA)is acid(18：2) with doub】ebonds．Ithas considerableattention colljugated gained becauseof its ancarcinogenic， gro、砜h—pfomoting to CLA propenies．Someteclllliquessynthesizeby chemicaland h￡Ivebeen abroad， biologica】processesproposed arestjll 1i