固定化酶的制备酪蛋白合成类蛋白的研究.pdfVIP

摘要 固定化酶可以提高酶的稳定性并增加酶的使用次数，以及容易与产物和底物分离等优点 而被广泛深入的研究。但目前常用的固定化方法在制各同定化酶时酶活损失较大，且载体常 常不可重复使用或载体的再生操作复杂，限制了同定化酶的产业化应_}fJ。本文针对目前固定 化酶方法的不足之处提出了相应对策并对新的酶同定化方法和l载体进行了探索。 本文选用Alcal∞e碱性内切酶平¨胰蛋白酶作为固定化对象，它们是一种米源广泛的蛋白 酶，在食品、轻纺、医学等领域有着广泛的应用。 研究了磁性飓q纳米粒子、活性炭及Fe30d活性炭复合粒子作为载体．采用吸附法制 各固定化酶。三种载体吸附酶活力比较：OFe30dCFe，04。沉降速度恰好相反。 以纳米Fe304纳米粒子和活性炭粒子为原料，用化学表面修饰技术使Fe，04粒子和炭粒 子表面功能化，将乙二氨基以共价键方式偶联在阳04粒子币I炭粒子的表面。制备出纳米高 分子络合剂。以此络合剂作为载体制备同定化酶。试验确定这两种载体固定化Alcalase碱性 内切酶和胰蛋白酶的同定化条件和固定化酶的性质。 采用液相沉淀法在磁性Fe304纳米粒子的表面包覆了一层Si02膜．制备磁性较强的纳米 Fe30dSi02复合粒子，作用此载体制备固定化酶。通过试验确定这两种载体同定化Alcalase 碱性内切酶和胰蛋白酶的固定化条件。 采用正硅酸乙酯与N-(，一氨乙基)．氨丙基三乙氧基硅烷在油包水形成的微胶囊中同步 水解的方法，一步法制备了氨基化的二氧化硅颗粒，这种颗粒大小均匀．氨基含量和颗粒大 小可控。此颗粒经戊二醛处理后，采用共价法固定Alealase碱性内切酶和胰蛋白酶。固定化 酶热稳定性，pH耐受性，贮存稳定性都明显高于游离酶．表明此颗粒可作为一种优良的酶 固定化载体。但是重复使用性不高，而且不易分离。 研究了Alcalase碱性内切酶和胰蛋白酶对酪蛋白的水解效果。采用三因素二次正交回归 设计。对水解反应中pH、温度(T)、酶．底物浓度比(【E】／【S】)、三个因素对水解度的影响．建 立了回归模型。通过F检验，T检验和应用验证，说明通过二次旋转正交回归设计建立的模 型．不仅较好地反映了蛋白水解反应体系运行的真实规律。而且与实际情况吻合较好。Alcalase 碱性内切酶水解酪蛋白时，三个因素对水解度的因子贡献率是：1pH【EMs】，其是优水解 条件为：[E]，【S】=2．5％，pH毋．5、T=50℃。胰蛋白酶水解酪蛋白时，三个因素对水解度的因 研究了类蛋白反应中pH、温度(T)、酶-底物浓度比([EMS])、底物浓度四个因素对合成 率的影响，通过正交试验和级差分析可知：影响Alealase内切酶催化合成类蛋白的产率的主 次关系为：pH给酶量(酶与底物比)温度底物浓度。确定类蛋白合成的最佳工艺条件为： 催化合成类蛋白的产率的主次关系为：pH给酶量(酶与底物比)温度底物浓度。确定类 捅螫 率为64．37％。 对类蛋白的起泡性与泡沫稳定性，乳化性与乳化稳定性进行了研究，并就几种冈素对类 蛋白物质的功能特性的影响进行了讨论，从结果可以看出，类蛋白物质的功能特性都有了一 定程度的改善。 关键词：固定化酶；酶水解；酪蛋白；类蛋白 Studieson ofImmobilized Preparation Enzyme andPlastein Casein Polymerizationby Abstract Theimmobilizedhavemore usetimesandeasier from enzyllles slability,more separation substtateand th811 jn methodshave bulksolution．Butcurrentimmobilization vroduetenzymes