补肾法、疏肝法对体外培养IVF-ET患者卵巢颗粒细胞中ACTA及Smads信号通路的影响.pdf

I IIIIIII IIIIII I MUlIII 目 录 中文摘要………………………………………………………………．．1 英文摘要………………………………………………………………．．6 英文缩写………………………………………………………………。．13 研究论文补肾法、疏肝法对体外培养IVF．ET患者卵巢颗粒细胞中 ACTA及其Smads信号通路的影响 前言………………………………………………………………．．14日U舌………………………………………………………………．．1珥 材料与方法………………………………………………………．．15 结果………………………………………………………………．．23 附图………………………………………………………………．．26 附表………………………………………………………………．．44 讨论………………………………………………………………．．50 结论…………………．……………………………………………．58 参考文献…………………………………………………………．．59 综述ACTA在生殖医学中的研究进展………………………………62 致谢……………………………………………………．………………72 个人简历………………………………………………………………．．73 万方数据 中文摘要 补肾法、疏肝法对体外培养IVF．ET患者卵巢颗粒细胞 中ACTA及其Smads信号通路的影响 摘 要 目的：前期研究证实，补肾法、疏肝法具有提高体外受精一胚胎移植 vitro (in fertilization．embryo 结局、提高卵母细胞质量的作用，本研究拟通过观察补肾法、疏肝法对 IVF．ET忠者体外培养卵巢壁颗粒细胞ACTA及其信号通路的调控作用， 以探讨两法促进卵泡发育、提高卵母细胞质量作用机制及其途经的异同。 方法： l含药血清制备 补肾调经方、逍遥散方含药血清：选取年龄在20．30岁，身体健康， 月经规律，B超显示有成熟卵泡，且无卵巢、子宫器质性疾病的女性志愿 者10名，分别服用补肾调经方和逍遥散方。补肾调经方、逍遥散方服用 方法是每日1剂，300ml，早晚分服。补肾调经方和逍遥散方连续服药3 天，第4天清晨空腹服用全天剂量药物(服药前禁食12h)，于末次服药 水浴30 min灭活补体，0．22pro无菌滤器过滤除菌、分装制备补肾调经方、 逍遥散方两种人含药血清。 正常血清：选取年龄在20．30岁，身体健康，月经规律，B超显示有 成熟卵泡，且无卵巢、子宫器质性疾病的女性志愿者5名，清晨空腹静 脉采血5ml，同上制备正常人血清，设为正常血清对照。 以上血清均．20℃保存备用。 2卵巢壁颗粒细胞培养 将含有颗粒细胞的卵泡液经梯度离心后获得壁颗粒细胞，于35mm 胞贴壁。分别加入补肾调经方和逍遥丸含药血清，分为补肾组和疏肝组， 补肾含药血清组与疏肝含药血清组分别设置低、中、高三个剂量组，正 常血清为正常组，不加血清为空白组。继续培养24h后，收集颗粒细胞。 第一批采用机械方法收集颗粒细胞，置于．80。C保存备用(用于实时荧光定 万方数据 中文摘要 量PCR)。第二批采用机械与酶结合的方法，迅速放入2％多聚甲醛中固 定(分别用于免疫组化和免疫荧光)。补肾高剂量组与疏肝高剂量组在 分别为补肾阻断剂组和疏肝阻断剂组，收集与实验方法同上。 Smad3、Smad4 mRNA的表达；采用免疫组化法、免疫荧光法检测颗粒 P．Smad3蛋白的表达。 结果： IIB、ALK4、Sma