茶儿茶素生物合相关基因表达的实时荧光定量PCR分析.pdfVIP

． f，，■工● ^”■ - 要 合成直接相关的酶是LAR和ANR。寻找儿茶素生物合成的关键基因，对开展茶树次 生代谢基因工程研究具有重要意义。 本论文首先对四个常用内参基因在茶树不同器官组织中的表达情况进行分析，筛 选适合实时荧光定量PCR(qRT．PCR)技术的内参基因；以茶树鲜叶为材料，利用 qRT．PCR技术，研究了儿茶素生物合成相关结构基因和调节基因的表达差异；利 用高效液相色谱(HPLC)方法和酶学检测方法，研究了儿茶素含量的变化和 DFR／LAR、ANR酶活性变化；探讨了儿茶素合成途径中儿茶素含量变化与相关基因 表达、酶活性变化之间的相关性。主要研究结果如下： 校正内参基因；比较不同成熟度叶片和愈伤组织时，可以选择GAPDH作为校正内参 基因。 2．应用qRT．PCR技术，研究了儿茶素合成相关基因在茶树鲜叶不同发育阶段中 的表达情况，结果显示，PAL、乃日，觑R和DFR的表达量随叶片成熟度增加而逐 w 渐下降；F3 在第一叶中表达丰富，随着叶片成熟度增加而表达量逐渐降低； IHCnA表C__的V_W_芍乃和 达量从第一叶到第四叶没有明显的变化；ANR和ANS表达趋势基 本一致，在芽和第三叶中有较高表达；CHS和CsMYB2从第一叶到第三叶表达量比 在芽和老叶中表达丰富；UFGT和CCoAOMT在第四叶中表达量最强。 3．HPLC检测结果显示，不同发育阶段茶鲜叶中，第一叶的儿茶素总量最高，芽 次之，成熟叶片中明显低于第一叶。从儿茶素各组分看，C、GC和EC含量较低且变 化不明显；而EGC的含量随叶片成熟度增加而增加，EGCG和ECG含量随叶片成熟 度增加而逐渐降低。 ANR．DEL的酶活性。酶活性变化规律与相应基因表达规律相符。 关键词：茶：儿茶素合成途径；基因表达；实时荧光定量PCR；酶活性； - ‘；f、- l： ● - Abstract Catechins involves biosynthesismainly enzymes ANSandANR．Of andANR F3’H，F3’5’H，DFR，LAR them，LAR ale directly with ofnon—ether interrelatedthe catechins and out synthesis C，GC，ECEGC．Figuring 一 catechins isof forthe keygenesinfluencing biosynthesisgreatsignificance genetic ， oftea metabolism． engineeringsecondary F ■