尿道下裂患者包皮细胞中雌激素受体基因启动子区甲基化状态的分析.pdfVIP

目 录 中文摘要…………………………………………………………………1 英文摘要…………………………………………………………………4 英文缩写…………………………………………………………………7 研究论文尿道下裂患者包皮组织中雄激素受体基因启动子区甲基化状 态研究 —1￡．，j一 日Ⅱ舌’……………………………………………………………………一8 材料与方法……………………………………………………………．10 结果……………………………………………………………………．21 附图……………………………………………………………………．23 附表……………………………………………………………………．25 讨论……………………………………·………………··……···……．26 结论……………………………………………………………………·28 参考文献………………………………………………………………·29 综述 尿道下裂病因学研究进展…………………………………………·32 致谢…………………………………………………………………………·45 个人简历……………………………………………………………………·46 万方数据 中文摘要 尿道下裂患者包皮组织中雄激素受体基因启动子 区甲基化状态研究 摘 要 目的：尿道下裂是由于阴茎尿道发育异常而导致的，是男性新生儿中 最常见的生殖器发育畸形。尽管研究不断的深入，尿道下裂的病因仍就有 许多的未知。然而，目前正处于尿道下裂病因学、流行病学和实验室研究 的新的分水岭。据推测，由内源性或外源性因素导致，在阴茎和尿道发育 关键期(8至14周)性激素浓度的变化，可能在尿道下裂的发生起一部 分作用。因为某些内源性或外源性因素，如激素水平，饮食和接触化学物 质可能会导致表观遗传改变，特别是在胎儿发育过程中，母亲所暴露的条 件。本实验的研究目的在于探讨雄激素受体基因甲基化状态与表达情况以 及双氢睾酮水平是否与尿道下裂的发生有关。 方法：将15例尿道下裂患者作为实验组，15例年龄相似的包皮环切 术患者作为对照组进行研究。 1包皮组织以4％多聚甲醛溶液固定，常规制备病理切片，苏木精一 伊红(脏)染色后观察组织病理变化。 2检测各患者血清双氢睾酮水平。患儿血液经离心后，上清装入 6．Opg／ml。 分析，因为这种技术是适合高度敏感和特异的甲基化检测。 RT reagent 为模板，采用实时定量聚合酶链反应，检测AR-mRNA在包皮组织中的 CCCA-3’，下游引物 表达情况(上游引物5’．AAGGC仉盯G儿叮GTCAG 5-CATTGAGGCTAGAGAGCAAGGC。3’)。 5提取组织在冰上匀浆提取总蛋白，BCA法测量各个组织的蛋白浓 度，使用Western．Blot法分析包皮组织中AR基因蛋白的表达情况。 万方数据 中文摘要 结果： l通过HE染色法观察组织病理的改变，发现无论尿道下裂患者，还 是包皮环切术的患者，组织表皮层都是角化的复层扁平上皮，上皮由上至 下：角质细胞层、透明细胞层、颗粒细胞层、棘细胞层和基底细胞层，真 皮层主要为结缔组织。只是相对于包皮环切术患者，尿道下裂包皮组织上 皮基底层突触变多，部分位置棘层、颗粒层变薄，整体分布不均匀。 2通过双氢睾酮ELISA试剂盒检测对血清DHT浓度的分析。发现尿 VS．123．15 道下裂患儿血清DHT水平