λ-卡拉胶寡糖对人脐静脉内皮细胞的增殖抑制作用及凋亡相关基因表达.pdfVIP

维普资讯 - 474- 药学学报 ActaPharmaceuticaSinica2008，43(5)：474—479 A-卡拉胶寡糖对人脐静脉 内皮细胞的增殖抑制作用及 凋亡相关基 因表达 宓婷艳 ，严小军h，陈海敏 ，林 晶 ，王 峰 ，徐炜烽 (1．宁波大学 浙江省海洋生物工程重点实验室 ，浙江 宁波 3l52ll；2．浙江省宁波市李惠利 医院检验科 ，浙江 宁波 315041) 摘要 ：为了探讨 A一卡拉胶寡糖 (A—carrageenan0lig0saccharides，A—CO)在体外抑制人脐静脉 内皮细胞 (HUVEC) 增殖作用及其分子机制 ，采用 MTT法检测 A—CO对 HUVEC存活率 的影 响，通过流式细胞技术检测 A—CO对 HUVEC 增殖周期的影响，测定细胞凋亡率 ，检测用药前后活性半胱氨酸蛋 白酶一3(caspase一3)的变化。同时采用半定量 RT— PCR方法检测凋亡相关基因mRNA的表达情况 。MTT检测结果显示 ，A—CO在高浓度 (1mg-mL )能 明显抑制细 胞增殖 。流式细胞仪检测到 A—CO作用 HUVEC后 ，出现早期凋亡细胞 ，且凋亡呈浓度和时间依赖性 ；对细胞增殖 周期的检测结果显示 ，与对照组相 比，A—CO作用后 G 期细胞 比例减少 ，s期 比例增加 ，并 出现凋亡峰 ；活化 的 caspase一3比例亦随用药浓度的加大而增加 。RT—PCR检测发现 0．3mg-mL A—CO作用人脐静脉 内皮细胞 l2、24 和36h后 ，细胞 TNFa、p53、caspase一8、caspase一3的mRNA表达上调 。表明A—CO能剂量依赖性地诱导 HUVEC细胞 凋亡 ，并引起 HUVEC的 s期阻滞 ，其机制可能与促进 TNFa、p53、caspase-8、caspase一3等基 因的转录，使细胞 内活 化的 caspase一3水平增加有关 。 关键词 ：A一卡拉胶寡糖 ；脐静脉 内皮细胞 ；TNFa；p53；caspase一8；caspase一3 中图分类号 ：R963 文献标识码：A 文章编号 ：05l3—4870(2008)05—0474—06 Proliferationinhibition ofA-carrageenan 0lig0saccharidesonHUVEC and expressionofapoptoticrelevantgenes MITing—yan，YANXiao-jun ，CHENHai—min，LINJin，WANGFeng，XUWei—feng (J．MarineBiotechnologyLaboratory，NingboUniversity，Ningbo315211，China； 2．DepartmentofClinicalLaboratory，LihuiliHospitalofNingboMedicalCenter，Ningbo315041，China) Abstract：Tostudytheanti—proliferationeffectofA—carrageenanoligosaccharides(A—CO)onhuman umbilicalveinendothelialcells(HUVECs)andexpressionofapoptoticrelevantgenes，theinfluenceof A—CO onHUVECsproliferationwasmeasuredbyMTTassay；apoptoticrate，cellcycledistributionandthe levelofactive caspase一3 ofHUVECswereanalyzed usingflow cytometry；themRNA levelofapoptosis relatedgeneswasdeterminedbyRT—PCR．Atahigh c