两种经济贝类与刺参微卫星-着丝粒作图及遗传图谱的整合.pdf

两种经济贝类和刺参微卫星一着丝粒作图及与遗传图谱的整合 2．栉孑L扇贝雌核发育二倍体遗传学特性研究 通过紫外线照射精子并用细胞松弛素B(CB)抑制减数分裂第二极体释放诱导了3 个栉孔扇贝雌核发育二倍体家系，研究了27个微卫星位点在3个雌核发育家系中的分 离，进行了微卫星一着丝点重组率分析，通过杂合后代的比例计算出重组率Y的范围是 0．05到O．78，平均值为0．41，发现在栉孔扇贝的某些染色体上存在交叉干涉现象。假设 完全干涉的条件下，计算出微卫星．着丝点距离范围是3cM．39cM。估算出栉孔扇贝雌 核发育子一代的近交系数为O．59。在3个对照组家系中这27个位点全部符合孟德尔遗 传规律，其中9个位点存在无效等位基因。而在3个雌核发育组中，在CF01，CF02， 代都只有母本的等位基因，没有发现父本特异等位基因，说明本实验用的雌核发育子代 100％为雌核发育个体。 3．栉子L扇贝微卫星标记一着丝粒作图及与遗传图谱的整合 着丝粒作图是进一步完善连锁图谱，研究染色体的交叉以及查明减数分裂过程中交 叉干涉情况的重要工具。从已发表的栉孔扇贝遗传连锁图谱所有19个连锁群中挑选了 137个微卫星标记，利用对照组筛选出90个母本杂合的微卫星标记，研究了这90个微 卫星在3个雌核发育二倍体家系中的分离，每个家系60个雌核发育子代，通过半四分 体分析，完成了19个连锁群的微卫星一着丝粒作图及与遗传图谱的整合。对照组分析结 果显示，90个微卫星位点全部符合孟德尔遗传，而雌核发育组中有4．4％的标记偏离两 证实了栉孔扇贝某些染色体中存在交叉干涉现象。发现在至少两个家系有分离的42个 标记中有1个在不同家系间有差异，表明个别位点在不同家系间的基因一着丝粒重组率 有所差异。着丝粒定位结果基本符合栉孔扇贝染色体核型，但在连锁图谱和着丝粒图谱 中发现一些位点顺序有所不同。本研究使栉孔扇贝遗传连锁图谱上的信息更加完善，可 作为基因组研究富有信息的工具，并为将来扇贝着丝粒结构和功能的研究奠定基础。 II 两种经济贝类和刺参微卫星一着丝粒作图及与遗传图谱的整合 4．皱纹盘鲍微卫星标记多重PCR的开发 通过对单个微卫星位点的PCR扩增，6％聚丙酰胺变性凝胶电泳检测微卫星的特异 性扩增条带，查清了各个微卫星位点的最佳PCR扩增条件。对筛选出的具有清晰扩增 产物，特异性好的位点进行位点的组合扩增，通过优化退火温度、反应体系、引物浓度 等条件摸索出最佳扩增条件。根据不同微卫星扩增产物的条带亮度，调整引物添加量， discus 最终达到较一致的扩增效率。本实验开发了4组皱纹盘鲍(Haliotishannai)微卫 星多重PCR扩增体系，提高了基因分型效率。运用CERVUS3．0软件对12个皱纹盘鲍 全同胞家系的372个子代进行家系鉴定，验证了这4组微卫星多重PCR在家系鉴定中 的效率，发现有4．9％的微卫星出现偏分离，无效等位基因频率为10．6％，平均多态信息 含量为O．82。仅用1组微卫星多重PCR模拟和家系鉴定的成功率分别为86％和90％， 两组则达到100％。结果表明，微卫星多重PCR技术能准确地把任意子代鉴定到各个家 系，可以满足大批量家系材料的分析，具有较好的应用价值。 5．皱纹盘鲍雌核发育二倍体遗传学特性研究 利用全基因组扩增技术，对皱纹盘鲍雌核发育二倍体面盘幼虫的DNA进行了基因 的分布情况。利用AFLP标记在全基因组水平评价了雌核发育的近交效率以及交叉干涉 育是加快皱纹盘鲍基因纯合程度的有效手段。在完全干涉条件下，AFLP标记一着丝粒遗 传距离范围是0．0．47．8 现明显的成簇分布。仅有少量标记(4．4％)重组率Y大于0．9，说明皱纹盘鲍的交叉干 涉程度较低或为中等水平。本实验首次利用海洋贝类幼虫的全基因组扩增技术实现了贝 类幼虫的AFLP标记半四分体分析，研究结果为今后皱纹盘鲍的遗传改良和选择育种计 划提供了重要参考。 III 两种经济贝类和刺参微卫星一着丝粒作图及与遗传图谱的整合 6．皱纹盘鲍微卫星标记一着丝粒作图及与遗传图谱的整合 利用紫外线照射精子并用细胞松弛素B(CB)抑制第二极体排放构建了2个皱纹盘 鲍第二极体抑制型雌核发育二倍体家系，从皱纹盘鲍微卫星连锁图谱