农杆菌介导epps抗草甘膦基因转化马铃薯品种.pdfVIP

摘要 摘 要 本研究所用外植体为马铃薯品种费乌瑞它的脱毒微型薯，利用农杆菌介导法将E尸．5：尸s 入马铃薯基因组中。经RT-PCR检测，证明EPSPS基因在马铃薯基因组中能够正常转录。试 验建立了高效的马铃薯再生体系和遗传转化体系，同时对遗传转化影响因素中的：激素种类 与浓度、脱菌抗生素的种类与浓度、共培养时间、筛选方式等进行了优化研究。通过了对抗 性植株的抗草甘膦测定，初步验证了转基因马铃薯对草甘膦表现出抗性。主要研究结果如下： 1) 确定了适宜于马铃薯品种费乌瑞它的薯块再生培养基为MS+lmg／LIAA+4mg／L ZT。 2) 确定了农杆菌浓度为00600=O．5，侵染时间为6rain时，薯片出芽率为72．43％，污 染率为8．7％。 3) 共培养时间对愈伤组织诱导率影响很大，薯片最佳共培养时间为3d。 4) 对不同的脱菌抗生素的浓度进行了比较试验，羧苄青霉素对含EPSPS基因的农杆 菌有效抑菌浓度是450mg／L，国产哈药头孢噻肟钠的有效抑菌浓度是450mg／L，进ElInvirogen 头孢噻肟钠的有效抑菌浓度是150mg／L。 5) 试验采用的抗性选择剂是草丁膦(PPT)，筛选方式为延迟5d筛选，结果表明薯 片芽诱导阶段PPT浓度为6 mgm，生根阶段的PPT浓度为4mg／L。 6) 交出现10株阳性信号，初步表明EP．51P．，基因已经整合到马铃薯基因组中。随机选取7株 植株中能够转录，最后通过Southern杂交出现5株阳性信号，进一步证明了倒强路基因已经 整合到马铃薯基因组中。 7) 对T1代5株转基因植株进行了PCR检测，获得阳性植株4株，并对其进行草甘膦 抗性鉴定结果表明转剧强雕基因植株能够耐受草甘膦浓度可达0．4 gm，是草甘膦田问施用量 的5．6倍，由此可以证明EPSPS基因在后代中表达。 关键词：马铃薯；EPSPS基因；农杆菌介导；遗传转化；草甘膦 Abstract S acterium--Mediated agro—-B of PotatowithEPSPSGene Abstract In this wastransferredinto study,EPsPsgene potatovariety“Favorite”by as transformation，Microtuberdiscswereusedexplants．Thetransgenic agro—bacterium-mediated andSouthern EPSPSwas weretestedPCR，PCR—Southern blotting，andgene plants by blowing to confirmedtobe inthe of wasalsoconfirmedbe integratedgenomepotato．EPSPSgene efficient and transformation RT—PCRdetection．An genetic transcriptedby