农杆菌介导的bbcp1基因转化马铃薯抗旱性研究.pdfVIP

摘 壁 摘 要 本研究以马铃薯品种黄麻子的脱毒微型薯为外植体，利崩农杆菌介导法将抗旱基丙 BcBCPl转入马铃薯中，经PCR和Southernblot检测证明BcBCPl基因已转入马铃薯基因组 中。试验建立了高效的马铃薯再生体系和遗传转化体系。对影响遗传转化冈素激素种类与浓 度、脱菌抗生素种类与浓度、共培养时间、筛选方式等进行了研究，通过对抗性植株相对含 水量、叶绿素含量，脯氨酸含量测定，初步验证转基因马铃薯植株对水分胁迫的抗性比对照 有明显提高。主要研究结果如下： 1薯块再生培养基确定为MS+ZT4 一 mg／L+IAA1m∥L，出芽率为86％。 2当农杆菌菌液浓度为OD600=O．5，侵染时间为5min时，黄麻子的出芽率最高达 87．19％，此时污染率较低仅为1．2％。 3共培养时间对愈伤组织诱导率影响很人，黄麻子薯块以共培养2d时转化效果最好， 薯块出芽率达到了83．97％，且污染率仅为6．77％。 4对不同产地脱菌抗生素的浓度进行了比较试验，国产头孢噻肟钠对BcBCPl基因的 有效抑菌浓度是400mg／L，进口头孢噻肟钠对BcBCPl基因的有效抑菌浓度为150mg／L， 且在有效的抑菌浓度下对外值体无不良影响。 5试验采用的抗性选择剂为草厂膦(PPT)，筛选方式为延迟7d筛选，结果表明薯块芽 诱导阶段PPT浓度为4mg／L，生根阶段的PPT浓度为5mg，L。 6目的基因BcBCPl试验共获得72株PPT抗性植株，其中35株通过了生根筛选 blot杂交检测中有6 (PPT5mg／L)，PCR检测结果表明有14株呈阳性，进一步的Southem 株检测有杂交信号，说明基因已经整合剑马铃薯基因组中，外源基冈土要是单拷贝插入。 7对杂交早阳性的转基冈植株进行了生物学的检测，将6个黄麻子转基因植株及1卜转 基因对照进行干早胁迫处理，分析转基冈植株利对照的生理指标变化情况，结果表明：在 干旱胁迫处理15d后，6个黄麻子转基冈植株的相对含水量与对照相比差异明显，对j!《l植 株辅氨酸含量提高了80．20％，而转基冈植株叶片脯氨酸含量变异率在181．63～396．28％之 间；同时测定6个转基冈植株与对照的n1‘绿素含鼍，结果表明对照植株叶绿素含量下降辐 度为43．73％，而转基因的植株叶绿素含量下降辐度在21。98％--32．62％之间。以上结果说明 在干旱胁迫处理I-夕F源BcBCPl基冈在6个转基因株系均已表达，提高了马铃薯转基冈植 株的耐旱性。 关键词：马铃薯召c日CP7基因抗旱性 Abstract Transformation ofPotatowith Agrobacterium·-mediated ResistanceGeneBcBCPl Drought Abstract Inthis wastransferredinto mainlocal study,BcBCPlgene Huangmazi，a cultivars，with method．The weremicrotuberdiscs．The were Agrobacterium-mediatedexplants transgenicplants testedPCRandSouthern wereconfirmedtobe inthe of by blotting，andthey integratedgenome