农杆菌介导家稗酮酸磷酸二激酶（ppdk）基因小麦转化体系优化的研究.pdfVIP

摘要 对受体基因型敏感性的依赖，制约农杆菌介导小麦受体材料的获取范围，外植 体材料获取途径的单一，限制了受体材料的获取数量，现有小麦转化体系不具备通 用性，造成农杆菌介导小麦转化的低效率。低效率导致小麦基因转化滞后于其他作 物。为实现对小麦基因组的C。改造，提高小麦的光合效率，必须突破外植体取材限 制，提高小麦的转化效率。本研究以扩大外植体数量，鉴定敏感型受体小麦品种为 研究基础，针对限制小麦转化效率的因素：受体因素、载体类型、侵染因素、分化 因素、随机因素，通过统计Gus基因的表达，鉴定各限制因素的最高表达效率，确 定体系优化条件，提高转化效率，获得转化植株，初步建立一套成熟胚愈伤、幼胚 愈伤相结合的高效、通用的转化程序。结果如下：1)济麦21、山东O卜35、邯 郸3475、师栾02一l、晋57的成熟胚诱导愈伤的成愈率在60％以上，可增加成熟胚 的诱导基数提高外植体数，诱导外植体作为优化体系材料；14个幼胚材料的成愈率 在85％以上，可作为主要转化材料。2)对农孝T菌侵染毒力鉴定，农杆菌株系C58c! 的毒力水平适宜侵染。对34个成熟胚及14个幼胚的愈伤组织侵染转化，扬麦10、 3475的转化植株经PCR检测，丙酮酸磷酸二激酶基因、hpt基因能够表达，为敏感 型受体小麦材料；幼胚愈伤组织扬麦10、扬麦158、成熟胚愈伤师栾02—1，6us基 因能够表达，且恢复培养14d，6us基因的表达效果较好，为体系优化材料；3)以 扬麦10、扬麦158、师栾02一l为材料的转丙酮酸磷酸二激酶转化体系中，预培养 再生愈伤率和6us基因表达率最高；预培养180d以上的师栾02—1，调节菌液浓度 缓冲介质，可提高6us基因表达。不附加任何激素的MS培养基绿点分化快。附加NAA 0．2 lmg／L、6-BAmg／L的培养基中能促进绿点形成芽点，抑制不定根的发育：对低 营养水平、低生长素浓度，促进芽点分化生根。 关键词：敏感型小麦；外植体；农杆菌介导；丙酮酸磷酸二激酶；体系优化；Gus formEchinochloa Pyruvate Dikinase(PPDK)Gene TransferringOrthophosphate var intoWheatmediatede crusgalli by frumentacea(roxb．)W．F．Wight Agrobacterium Author： Guo zhijiang and Major： cropproductionfarmingsystem Supervisor：Prof．ZhangFenglu Zhao Ming Abstract The of of restrainedthe ofthe dependencegenotypesensitivityreceptor scope agrobacterium- mediatedwheat accesstoobtain limitsthenumberof materials， receptor．Thesingle explant receptor