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苹果果实sdh因cdna片断克隆及其活性调控机理研究
目 录
中文摘要…………………………………………………………………………………I
英文摘要…………………………………………………………………………………IⅡ
缩略语表…………………………………………………………………………………V
文献综述植物山梨醇代谢及其相关酶研究进展……………………………………………1
1山梨醇的含量及分布……………………………………………………………………1
2山梨醇在植物体内的生理功能…………………………………………………………1
2．1光合作用产物和同化物运输物质……………………………………………………1
2．2作为代谢基质和贮藏物质……………………………………………………………2
2．3作为渗透调节物质和保护物质提高抗逆性…………………………………………3
2．4作为信号分子…………………………………………………………………………5
2．5组织培养中作为碳源物质……………………………………………………………5
2．6对植物生长发育的调控作用…………………………………………………………5
3植物山梨醇代谢及其相关酶的研究……………………………………………………6
3．1山梨醇代谢研究………………………………………………………………………6
3．2山梨醇代谢相关酶研究进展…………………………………………………………6
4本研究的目的和意义…………………………………………………………………16
第一部分苹果山梨醇脱氢酶(SDH)基因cDNA片断的克隆………………………………17
1材料与方法……………………………………………………………………………………18
1．1材料………………………………………………………………………………18
1．2方法…………………………………………………………………………………19
2结果与分析……………………………………………………………………………23
2．1苹果果实总RNA的提取…………………………………………………………23
2．2cDNA第一链的合成及PCR扩增…………………………………………………23
2．3扩增产物的cDNA克隆……………………………………………………………24
2．4序列测定与分析……………………………………………………………………25
3讨论……………………………………………………………………………………26
3．1关于山梨醇代谢及其代谢酶的深入研究………………………………………26
3．2关于苹果果实总RNA的提取……………………………………………………27
3．3总RNA的质量的检测……………………………………………………………28
3．4关于RT—PCR体系………………………………………………………………29
3．5关于序列分析……………………………………………………………………30
第二部分套袋对红富士苹果山梨醇代谢和相关酶活性的影响……………………………3l
l材料与方法……………………………………………………………………………32
1．1材料………………………………………………………………………………32
1．2可溶性糖的测定…………………………………………………………………32
2
1．3酶液的制备…………………………………………………………3
1．4相关酶活性的测定………………………………………………………………32
2结果与分析……………………………………………………………………………33
2．1套袋对红富士苹果果实可溶性糖含量的影响…………………………………33
2．2套袋处理对红富士苹果果实SDH和SOX活性的影响…………………………34
2．3苹果果实可溶性糖含量与山梨醇代谢相关酶问的相关性……………………35
3讨论…………………………………………………………………………………36
第三部分外源糖和激素对苹果果实山梨醇脱氢酶的调控…………………………………38
1材料与方法…………………………………………………………………………………39
1．1材料………………………………………………………………………………39
1．2实验方法…………………………………………………………………………39
1．3酶的提取与活性测定…………………
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