苹果花芽孕育的白质组学及其特异蛋白的研究.pdfVIP

苹果花芽孕育的蛋白质组学 及其特异蛋白的研究 摘 要 苹果是世界上最重要有经济价值豹果树之一，可是苹果育种和其它木本植物 一样一直落后于其它作物，最主要的一点是存在着童期长的问题。如能搞清果 树花芽分化机理，就能有效地启动成花控制基因，缩短果树童龄期，加速果树 育种进程，所以果树花芽分化研究历来是果树生理学的重要研究内容。以同砧 木同品种、不同品种的、同时停长的苹果短技和不同发育阶段的杂交种实生树 为材料，分别从形态解剖学、内源激素水平、可溶性蛋白含量以及不同发育阶 段、不同器官的特异蛋白双向电泳分析，运用蛋白质组学研究技术(双向电泳 技术，生物质谱技术、生物信息学技术)对苹果花芽孕育的机理进行了研究。 研究结果如下： 1．苹果芽中富含多酚类化合物、色素及其氧化产物，严重干扰双向电泳技 术的应用，通过苹果短枝项芽蛋白质样品制备、电泳及染色等方面的技术改进， 探索出了一种可获得重复性好，清晰度高的蛋白质双向电泳图谱技术；电泳图 谱可分辨出苹果树短枝顶芽蛋白质斑点数765个左右，苹果短枝顶芽蛋白质的 l国～178．o kDN79．0 相对分子量约在13．o kD范围内，主要分布在13．0 kD之 间。等电点约在4～9．5范围内。 2．对红富士、金冠苹果和“红富士×金冠”杂交种实生树短枝停长后3—9 周的花芽、叶芽进行蛋白质双向电泳研究。结果表明，7周的2-DE图谱比较，分别 有283个蛋白点在表达上有明显的质和量的变化。其中：162个蛋白点在花芽形 态分化后2-DE图谱中的表达量均高于花芽形态分化前，110个蛋白点的表达量低 于花芽形态分化前；4个蛋白点(16．4、30．2、40．3、65．1kD)为花芽形态分化开始 为初后(侧花出现)花芽2-DE图谱所特有，1个蛋白点(77．1kD)为萼片期花 ．淘匿壅些盍堂攫±鲎壁盈塞 芽2-DE图谱所特有。这些结果为进一步获得苹果花芽各发育时期的相关蛋白， 进而得到相关的特异基因，在分子水平上揭示苹果花芽分化机理奠定重要基础。 3． 红苹果，结果表嘎：PP333可使时芽的节位数增长，但对花芽的节位数没有职显的 影响。而GA3对叶芽节位数没有影响，但对首红苹果花芽节位数则有减少的趋 向。二者处理对苹果花芽形态分化开始时期没有影响，但PP333加速了花芽形态 分化进程，GA3延迟了花芽形态分化进程。喷PP333，提高了ZR(玉米素核苷) 比值，从而促进了花芽形成。相反，GA3处理，降低了ZR／IAA、ZR／GA3、 ABA／IAA和ABA／GA3比例，从而抑制了花芽形成。 4．对红富士苹果进行促花(喷PP333)和抑花(喷GA3)调控处理，利用双 向电泳技术分析处理后芽体的蛋白质图谱的变化动态。结果表明：促花或抑花 处理，其特异蛋自表达是随促进或延缓花芽分化迸程变化而变化，不同的是， 喷施PP333后，在花芽形态分化前出现了2种新的特异蛋白，分别是43．3、51．1kD 蛋白。而GA3处理，花芽形态分化前也出现了1种新的37．4kD特异蛋白。这几 种特异蛋白的出现，可能表明苹果促花和抑花具有不同的基因表达与蛋白质代 谢特征，能否确认是促花或抑花的特异蛋白，有待进一步研究。 5．对红富士苹果花芽形态分化开始时的4个特异蛋白点用基质辅助激光解 吸P电离飞行时间质谱(MALDI--TOFMs)进行肽质量指纹谱的分析，并通过检 索不同的数据库进行蛋白质鉴定与功能预测，初步认为第256号(16．4I‘D)、298号 (30．2kD)蛋白点是未知蛋白，第327号(40．3kD)蛋白点是与合成酶有关的蛋白， 第367号蛋白点(65．1ira)是一个与转录有关的RNA结合蛋白。同时对数据库检 索策略以及蛋白质鉴定成功率等方面进行了探讨。 关键词：苹果；花芽；蛋白质组学：特异蛋白；双向电泳；内源激素；生物信 息学；生物质谱；肽质量指纹谱 b ：： ：= ：： ：： ：：塑室壅些奎耋堡圭兰丝塞：：：== Studieson ProteinsandProteomics