猪α干扰素的原核表达及抗高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒活性测定.pdfVIP

维普资讯 第30卷 第7期 中 国 预 防 兽 医 学 报 Vo1．30．No．7 2008年 7 月 ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicine Ju1． 2008 猪 0(干扰素的原核表达及抗高致病性 猪繁殖与呼吸综合征病毒活性测定 闰若潜 ，赵 雪丽，赵明军 ，盛 敏 ，吴志明 ’ (河南省动物疫病预防控制 中心 ，河南 郑州 450008) 摘 要：为了研究高效广谱的基因工程抗病毒制剂，本研究采用PCR技术 自猪肝脏总DNA 中扩增、克隆猪 0t干扰素(PoIFN． 1成熟肽基因并亚克隆入 pQE30载体进行原核表达，对表达的融合重组猪 Ot干扰素(rPoIFN．) 蛋 白通过尿素变性、低浓度蛋 白复性液复性、PBS溶液透析等步骤进行纯化 ，采用细胞病变抑制法分别测定 rPo ． 蛋白在 PK15细胞上抗水泡性 口炎病毒(vsv)增殖活性及在Marc．145细胞上抑制高致病性猪繁殖与呼吸 综合征病毒(PRRSV)~增殖活性 ，以分别评价 rPo ．0t的活性单位及其体外抑制高致病性 PRRSV增殖所需的最 低浓度。结果表明，克隆的PolFN．Ot成熟肽基因全长50lbp，编码 l66个氨基酸；表达的rPo ．Ot蛋 白分子量 大小 2O．7ku左右 ，与预期大小相一致；经纯化后的蛋白纯度在 95％以上 ；纯化的rPoIFN．0【蛋 白在 PK15细胞 上抗 VSV病毒活性单位为 1．4482×10IU／mL(5．2×10IU／mg)，在 Marc．145细胞上能完全抑制高致病性 PRRSV 增殖所需的rPo ． 蛋白最低有效剂量为 640U／mL(2．3×10U／mg)。这些研究结果为新型基因工程抗病毒制剂 的开发 以及用于高致病性 PRRSV性疾病的预防和治疗奠定了基础。 关键词：猪 干扰素；表达；纯化；高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒；抗病毒活性 中图分类号 ：$852．4．2 文献标识码 ：A 文章编号 ：1008—0589(2008)07—0570-05 Antiviralactivityoftheporcineinterferon—alpha proteinagainsthigh—pathogenicporcinereproductive andrespiratorysyndromevirus YANRuo．qian，ZHAOXue—li，ZHAOMing-jun，SHENGMin，wuZhi-ming’ (HenanCenterforAnimalDiseasesControlandPrevention，Zhengzhou450008，China) Abstract：Toexploitageneticengineeredantiviralmedicineagainsttheporcineimmunesuppressiondiseases，matureporcine interferon-alpha(PoIFN-Ot)genewasamplifiedbyPCR．ThePCRproduct，whichcomprised501bpnucleotidesencoding166 aminoacids．wassequencedandclonedintotheprokaryoticexpressionvectorpQE30．TheexpressedrecombninatPolFN- (rPoIFN． 、proteinwaspurifiedunderdenaturedconditionandrefoldedinanovelre-naturationbuffer．TheCPEsuppressionby rPoIFN． wastestedfor