猪圆环病毒2型ORF3编码蛋白的体外表达.pdfVIP

畜牧与兽医2008年第40卷第9期 ·25 · 猪 圆 环 病 毒 2型 ORF3编 码 蛋 白 的 体 外 表 达 李增魁 ( 青海大学农牧学 院动物医学系 ，青海西宁8 10003) 摘要：设计特异引物 ，以猪 圆环病毒2型( PCV- 2) 杭州株HZ020 1的基因组DNA为模板，PCR扩增 出ORF3基因，构建了pGEX- 4T．1一ORF3原 核表达载体和pEGFP—C2-ORF3真核表达载体。ORF3基 因全长3 15 bp，编码105个氨基酸。SDS- PAGE、We t ern b l ot 分析及真核PKl 5细胞转 染结 果显示：ORF3 蛋白在大肠 杆菌中以包涵体形 式存在，分子量 大小约为37．7 ku；ORF3重组蛋 白在真核PKl 5细胞 的细胞核和细胞浆都有表达，尤 其在细胞核中表达量较高，且对细胞有一定的毒性。 关键词：猪圆环病毒2 型；ORF3 ；原核表达；真核表达 中图分类号： 852．65 文献标识码：A 文章编号 ：0529-5 130( 2008) 09—0025—06 I n Vi t r o expr e i on of ORF3 pr ot ei n f r om por c i n e ci r covi r u t yp e 2 LI Zen g—kui ( De par t me nt of Vet er i nary Med i ci ne ，Qi ngh ai Uni ver i t y，Xi ni ng 810003，Ch i na ) Ab t r act ：The peci f i c pr i mer wer e de i gn ed and yn t he i zed ac cor d i ng t o t he pu bl i hed equ ence of ORF3 gene of por ci ne ci r eovi r u t ype 2( PCV- 2) ．The compl et e DNAf r a gme nt en cod i n g ORF3 pr ot ei n Wa ob t ai ne d f r om vir a l DNA of PCV一2 HZ0201 by PCR and ub - cl o ned i nt o pr ok ar yot i c exp r e i on vect or pGEX- 4T- 1 and eukar yot i c exp r e i on vect or pEGFP- C2 ．ORF3 ge ne en co di n g 105 ami no aci d w髓 3 15 bp i n l e ngt h．The anal y i of SDS- PAGE．We t er n bl ot a nd t r an fect i on a ay howe d t hat t he ORF3 r ec ombi na nt pr ot ei n wi t h t he mo- l ecul ar of 37 ．7 ku exi t e d a i ncl u i o n i n E r ec ombi na nt wa i n cel lul ar nu cl eu a nd we i gh t ma i nl y body col i ；t he pr ot ei n expr e ed c yt opl a — ma o f PK一1 5 cel l a nd howed ome t o PK- 15 cel l ．