猪场爆发猪繁殖与呼吸综合征的临床诊断及实验室检测.pdfVIP

维普资讯 · 8· 中国兽药杂志 2008，42(7)：8—12／汤德元，等 猪场爆发猪繁殖与呼吸综合征 的临床诊断及实验室检测 汤德元，曾智勇，李春燕，陶玉顺，汪忠荣，刘 霞 (贵州大学动物科学学院，贵阳 550025) [收稿 日期]2008—06—03 [文献标识码]A [文章编号]1002—1280(2008)07-0008-05 [中图分类号】$852．659．6 [摘 要] 在对某猪场疑似猪繁殖与呼吸综合征的临床诊断、病理诊断、抗体快速金标检测、回 归动物实验和细胞病变观察的基础上，参考 GenBank上PRRSVLV和VR一2332毒株核苷酸序 列，设计并合成一对特异性引物，以提取来 自贵州某猪场猪繁殖与呼吸综合征疑似病料(包括血 液、肝、肺、肾、淋巴结、心、脾组织)的总RNA为模版，应用反转录一聚合酶链式反应(RT—PCR) 方法，经94℃ 预变性2min；94℃变性45S，60℃退火 1min，72℃延伸 1min进行35个循环； 72℃再延伸 10min进行扩增。扩增产物经回收纯化后，应用pMD18一T载体进行克隆后测序。 测序结果表明，所扩增DNA片段大小为716bp，该核苷酸序列与湖南发现的PRRSV序列同源性 为 100％。本实验结果说明临床诊断及实验检测方法作为猪繁殖与呼吸综合征的诊断方法是可 靠的，可为猪繁殖与呼吸综合征诊断提供参考依据。 [关键词】 猪繁殖与呼吸综合征；临床诊断；实验检测 TheClinicalDiagnosisandExperimentDetection of PRRSinaHogpen TANG De—yuan，ZENG Zhi—yong，LIChun—yah，TAO Yu—shun，WANG Zhong—rong，LIU Xia (CollegeofAnimalSciences，GuizhouUniversity，Guiyang550025；China) Abstract：Onthebaseofclinicaldiagnosis，pahtologydiagnosis ，rapidantibodydetectionGoLdCard，regress animalexperimentnadobservecytopahticeffectforidentificationporcinereproductivenadrespiratory syndrome (PRRS)ofhogpen．ApairofspecificprimersweredesingedreferringtoPRRSVLVstrainandVR一2332nucle- otideesquencefrom GenBanktoextractthetotai RNA ofrm porcinereproductiveandrespiratory syndromesuspec- teddiseasematerial(includingblood，liver，lung，kidney，lymphnode，heart，spleen)fromahogpen，RT— PCRmethod Was usde as thefollowing．denaturing94oC 2rain；94℃ 45S，60oC 1min，72oC 1minnad35 cycles：72℃ 10mintofurtherextendhteamplification．PurifiednadrecoveriedPCRproductsweretestedafter clonde bypMD18一Tcloningvector．Theresultsshowedhtathteexpna sionnucleotideseuqenceofhtesizeWas 716bp htesameasHunan PRRSV strainof100％ ．Th eresultsindicatde clinicaldiangosisnadexperiment detectionweree