猪圆环病毒2型ELISA抗体检测试剂盒的研制及应用.pdfVIP

维普资讯 第30卷 第 7期 中 国 预 防 兽 医 学 报 Vo1．30，No．7 2008 年 7 月 ChineseJournalofPreventiveVeterinaryM edicine Ju1． 2008 猪圆环病毒2型 ELISA抗体检测试剂盒的研制及应用 张朝霞，刘长明 ，危艳武，袁 婧，黄立平 (中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 兽医生物技术国家重点实验室 ／猪传染病研究室 ，黑龙江 哈尔滨 15OOO1) 摘 要：利用纯化的重组杆状病毒表达猪圆环病毒 2型(PCV2)Cap蛋白作为检测抗原，建立一种间接 ELISA 方法用于血清抗体检测。昆虫细胞株(Sf-21)接种重组杆状病毒 ，对蛋 白表达参数及纯化工艺进行了优化，制备了 5批重组蛋 白抗原，表达量 占总蛋白的 18．7％左右；Ni2亲和层析柱纯化获得重组蛋白纯度为 90．1％；重组蛋 白 可被特异性抗体识别，具有 良好的免疫活性。用建立的ELISA法对 30份 已知阴性血清样本检测临界 oD4蛐 值为 0．343；ELISA与 IPMA对 150份血清进行平行检测符合率为95．3％，特异性为 91．2％，敏感性为96．5％；与其 他几种常见猪病毒参考血清无交叉反应。组装的试剂盒批 内和批间变异系数分别为4．0％～4．8％和8．9％～9．9％； 置 -20℃保存 12个月稳定。试剂盒对人工感染猪血清检测结果 ，接种后第 5周抗体 阳转 ，第 8周～9周抗体水 平达到高峰；对来 自黑龙江、吉林、河北、上海等地猪场 1085份血清抗体检测，阳性率为 73．6％。研制的 EusA试剂盒为临床 PCV2血清抗体检测及疫苗免疫效果的评价提供了技术手段。 关键词 ：猪 圆环病毒 2型；重组蛋 白；间接 ELISA；抗体检测试剂盒 中图分类号 ：$852．659．2 文献标识码 ：A 文章编号 ：1008．0589(2008)07．0548．05 DevelopmentandapplicationofindirectELISA kitforthe detectionofantibodiesagaintporcinecircovirustype2 ZHANG Zhao-xia，LIU Chang-ming，WEIYan-V(U，YUAN Jing，HUANG Li-ping (DivisionofSwineInfectiousDiseases，NationalKeyLaboratoryofVeterinaryBiotechnology，HarbinVeterinary ReserachInstituteofChineseAcademyofAgriculutralSciences，Hrabin150001，China) Abstract：AnindirectELISAwasdevelopedfordetectingantibodiesagainstporcinecircovirustype2(PCV2)usingbacul- ovirus-expressedrecombinantcapsid(Cap)proteinasantigen．Spodopterafrugiperda(Sf-21)insectcellswereinoculatedwithhte recombinnatbaculovirusandCpa productswereidentifiedbyWestern blotpurifiedunderoptimized conditions．In comparison wihtimmunoperoxidasemonolayerassay(IPMA)，hterewas95．3％coincidencebetweentheELISAandIPMAbasedondetection of150serum samples．．Theas