isg15的原表达和多克隆抗体的制备及其与猪瘟病毒相互作用的初步研究.pdfVIP

ISGl5的原核表达和多克隆抗体的制备 及其与猪瘟病毒相互作用的初步研究 摘要 猪瘟病毒是猪烈性传染病猪瘟的病原，属于黄病毒科瘟病毒属，是一 种单股正链的RNA病毒，能够在感染的猪体内引起持续性感染。ISGl5是一 种由I型干扰素诱导机体产生的抗病毒蛋白，研究表明ISGl5对一些病毒 如人免疫缺陷病毒(眦v_1)、B型流感病毒等具有抗病毒作用。本实验室使 用基因芯片技术检测猪瘟病毒感染猪只的外周血单个核细胞的基因转录谱 的研究中，发现猪瘟病毒感染猪后1、3、6、9天采集的外周血淋巴细胞中 是为了进一步在蛋白水平上验证感染猪瘟病毒后细胞ISGl5的表达变化， 并探讨在宿主细胞中ISGl5与猪瘟病毒之间的相互关系，为进一步探索猪 瘟病毒的持续性感染的分子机制打下基础。 本研究通过重组人I型干扰素IFNQ一2b诱导PK_15细胞转录干扰素刺 3．O。重组原 基因亚克隆至原核表达载体pGEx一4T一1与真核表达载体pCDNA 经过Ni_NTA树脂纯化重组蛋白，将纯化的ISGl5重组蛋白与弗氏佐剂乳化 质体介导的方法转染PK一15细胞，用新霉素类抗生素G418筛选获得稳定表 达ISGl5蛋白的PK-15细胞系。 h的ISGl5 检测猪瘟病毒感染PK—15细胞后的O、3、6、12、24、48、60 蛋白表达变化，ISGl5蛋白在猪瘟病毒感染的PK一15细胞中表达增加，推测 是ISGl5蛋白介导的对猪瘟病毒蛋白的泛素化水解途径被猪瘟病毒阻断。 关键词：ISGl5基因多克隆抗体制备猪瘟病毒细胞系筛选相互作用 OFISGl5ANDPOLYCLONAL EXPRESSIO’N PI的KARYOTIC PRELn肛NARY A STUDYOF ANTIBODYPREPARATION，AND ISGl5A卜m BETWEEN CSFV T髓INTERACTIoN ABSTRACT Cl私sicalsv旷iIle蠡wervirus(CSFV)isa infectious pathogen硒rlli曲ly dise嬲es嬲swiIlef．ever t0FlaviViridae isa swille，belon百ng pestiVin埯g即嵝；．It iIl alld str卸mofRNAVimSandcaIlcause iIlfection positivesijr谬e persi咖nt isa i11duCed I酞彘ron．Some k砌of枷iV砌proteillbytype pigs．ISGl5 ISGl5 some 曲udies§hownⅡ1at Vimses，such嬲 possessedantiViral劬i够t0 me