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2016-02-20 发布于贵州
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i型鸭肝炎病毒克隆抗体的制备.pdf

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i型鸭肝炎病毒克隆抗体的制备

摘要． Viral Virus)引起的以鸭病毒性肝炎(DuckHepatitis，DVH)是由鸭肝炎病毒(DuckHepatitis 三个型之间没有抗原交叉性。其中以传统l型DHV分布最广泛，对3周龄内的雏鸭致死率高达90 ％以上。目前，2型和3型DHV只在中国、英国和美国有相关报道，但致死率较低。目前我国较为 RNA病毒。该病毒颗粒比较小，大小只有20nm左右。本研究将DHV-1进行增殖和纯化，利用纯化的DHV-I免疫小鼠，最终制备出lO株抗DHV-I的单克隆抗体。 h--96 本实验将DHV-1接种鸡胚，收取24h死亡鸡胚的尿囊液。经过氯仿抽提后将病毒用 PEG-6000进行浓缩，浓缩后的病毒悬液以5x h。将纯化的DHV-l免疫6 104Xg的速度进行离心16 单克隆抗体的效价、特异性、稳定性、亚型、腹水效价和中和活性进行了鉴定。结果表明：lO株单杂交瘤细胞上清进行ELISA检测，发现细胞分泌抗体的能力稳定性较好；其中有8株杂交瘤细胞分法对其特异性进行检测，结果显示10株单克隆抗体有6株单克隆抗体与DHV-1C产生交叉反应，但与SPF鸡胚尿囊液、呼肠孤病毒和鹅细小病毒没有交叉反应，特异性较好。 DHV．1蛋白结构和功能的研究以及病毒的分子致病机理提供有利条件。关键词：鸭肝炎病毒，单克隆抗体，ELISA Abstract Viral andfatal Duck isthecausativeofDuck acute Virus(DmO agent HepatitisfDVH),an Hepatitis diseaseof of and nOcrossreaction ducklings．ThreetypesDHV(DI-IV-1，DHV-2Dnv-3)showed among them．Traditionalisthemost distributedand啪causemorethan in DHV．1 widely 90％mortality under3weeksof DI-IV-2and in theUSA reportedChina,t／K,and ducklings age，while DHV·3铂℃only with inChina．Which with low isthemOSt serotype to mortality．DHV-1Apopular belongspieornaviridae 20lirainsize．Inthis the w勰usedtoimmunizemice RNAstrandandabout single sIudyIppuri6酣DI-IV·1 to antibodies．10monoclonalantibodiesDI-1V-1 monoelonal produce