上海和内蒙古地输血性传播病毒的流行病学调查及orf1基因的克隆表达.pdfVIP

摘 要 [1] 输血型传播病毒（Torque Teno virus，TTV)是由 Nishizawa 于 1997 年在研究 原因不明肝炎患者的过程中，用 RDA （代表性差异技术）方法从一名58 岁的日本患 者血液中分离到的一种病毒，是继甲、乙、丙、丁、戊、己、庚之后的又一肝炎病毒 --辛型肝炎病毒，从属与指环病毒科（Anellovirida）。该病毒为单股环状 DNA，病 毒基因组长度在 2.1-3.9 KB 之间，有两个主要的开放阅读框（ORF）,ORF1 可能编码 病毒的主要结构蛋白，ORF2 主要编码非结构蛋白。TTV 能感染人、非人灵长类、猪、 犬、猫、牛、羊、骆驼等哺乳动物，对禽类的感染也有报道，但是，TTV 的大小及特 性在不同物种中差异较大，仅人的 TTV 就存在 40 多个基因型。TTV 感染范围较宽， 传播途径较广，与人类隐性肝病密切相关，因此引起了世界各国学者的广泛关注。 本试验根据 GeneBank 公开发表的 SAa-10（AB060594）全序列设计型特异性引物， 通过巢式 PCR 方法检测来自上海某儿童医院的 150份、年龄在 1个月到 8 岁之间的儿 童粪样和 109 份成年人血样，来自内蒙的 96 份中老年人的粪样，结果发现：内蒙 96 份中老年人粪样中没有阳性样品，上海 150 份儿童粪样中检测到 3 份，上海 109份血 样中有 8 份阳性，阳性样品的序列与 SAa-10 序列以及不同阳性样品序列间的同源性 均在 90%以上，说明TTV 的感染不存在地域差异性，但是，感染率可能与年龄有一定 的相关性。 参照 SAa-10 （AB060594）对其中一份阳性样品进行全序列扩增，命名为L-SH (HM224451)，通过Cluster 比对及Mega 4.0 进行进化树分析表明，本实验分离株 L-SH (HM224451)与日本株 SAa-10 （AB060594）的同源性达93.8%，进一步说明了同一基因 型TTV 之间不存在地域差异。对分离株 L-SH ORF1 中的蛋白,运用 DNA-Star 中Protean 软件进行抗原表位分析，选取抗原表位密集的区域设计引物进行扩增，并连接到表达 载体 PET-30 中，经 IPTG 诱导表达。结果发现，此蛋白能高效表达并以包涵体形式存 在，为后续 TTV 的ELISA 检测和疫苗抗原的研究进行有意义的探索。 关键词：TT 病毒；流行病学调查；ORF1；克隆表达 The epidemiology of Torque teno virus in Shanghai and in Inner Mongolia and the expression of ORF1 Abstract Torque teno virus (TTV) was first discovered in 1997 in Japan, from the serum of a patient with acute post-transfusion hepatitis of unknown etiology by Nishizawa, using the method of RDA.TTV is a new hepatitis virus after the discover of A-G hepatitis virus, but it was classified into the family Anelloviridae. TTV is a small non-enveloped single-stranded circular DNA virus, the genome of it has a range of 2.1-3.9kb in length and contains two main open reading frames (ORFs), ORF1 encodes the structural protein, ORF2 main encodes the non-structural protein. However, in addition to humans, TTV can also be det