小鹅瘟肠道损伤制的研究与vp3基因重组腺病毒的构建.pdf

目 录 中文摘要……………………………………………………………………………………………I 英文摘要…………………………………………………………………………………………III 1引言……………………………………………………………………………………………一2 1．1小鹅瘟疫苗的研究进展……………………………………………………………………1 1．1．I小鹅瘟常规疫苗………………………………………………………………………I 1．1．2小鹅瘟基因工程疫苗…………………………………一……………………………．2 1．1．3腺病毒载体疫苗发展…………………………………………………………………3 1．2肠道炎症与炎症因子………………………………………………………………………3 1．2．1肠道炎症………………………………………………………………………………3 1．2．2参与炎症反应的炎症介质……………………………………………………………4 1．3目的与意义…………………………………………………………………………………6 2材料与方法……………………………………………………………………………………一7 2．1主要仪器与试剂……………………………………………………………………………7 2．1．1病毒……………………………………………………………………………………7 2．1．2主要载体与菌株………………………………………………………………………7 2．1．3主要试剂………………………………………………………………………………7 2．1．4主要仪器………………………………………………………………………………7 2．2实验动物及分组……………………………………………………………………………8 2．2．1雏鹅病毒接种及分组…………………………………………………………………8 2．2．2免疫小鼠及分组………………………………………………………………………8 2．3炎症相关基因mRNA表达的检测………………………………………………………．8 2-3．1总RNA提取及反转录………………………………………………………………．．8 2．3．2引物设计与合成………………………………………………………………………9 2．3，3普通PCR扩增基因…………………………………………………………………．．9 2．3．4基因序列测定鉴定…………………………………………………………………．．10 2．3，5实时定量PCR扩增…………………………………………………………………】0 2．3．6融解曲线分析………………………………………………………………………．．10 2．3．7PfIaf亿法分析基因表达的相对差异…………………………………………………10 1 2．4小鹅瘟病毒VP3基因组克隆……………………………………………………………l 2．4．1引物设计与合成………………………．．．．………………………………．．．．………．．11 2．4．2病毒DNA提取……………………………………………………………………，。。】1 1 2．43目的基因PCR扩增及纯化……～…………………………………………………1 I 2．4．4PCR纯化产物与PEASY．TI载体连接……………………．．．．…………～………．．1 2．5．2酶切产物与穿梭质粒连接～……………………………………………．．．．………。】2 东北农业大学农学硕士学位论文 2．5．3质粒DNA提取………………………………………………………………………12 2 2．6同源重组获得腺病毒质